卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备

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卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备

张胜楠, 吴莹, 孙云, 曹贞洁, 周永灿

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张胜楠, 吴莹, 孙云, 曹贞洁, 周永灿. 卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备[J]. 热带生物学报, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

引用本文:

张胜楠, 吴莹, 孙云, 曹贞洁, 周永灿. 卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备[J]. 热带生物学报, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

ZHANG Shengnan, WU Ying, SUN Yun, Cao Zhenjie, ZHOU Yongcan. Purification of Serum IgM from Trachinotus ovatus and Preparation of Mouse Sera Anti-IgM[J]. Journal of Tropical Biology, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

Citation:

ZHANG Shengnan, WU Ying, SUN Yun, Cao Zhenjie, ZHOU Yongcan. Purification of Serum IgM from Trachinotus ovatus and Preparation of Mouse Sera Anti-IgM[J]. Journal of Tropical Biology, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

海南大学海洋学院/海南省热带水生生物技术重点实验室/海南省南海海洋资源利用国家重点实验室, 海口 570228

基金项目:

海南省博士后科学基金(BSH-RST-2018001)

海南省重大项目(ZDKJ2016011))

国家自然科学基金项目(31702379,31560725)

第一作者:
张胜楠(1992-),女,海南大学海洋学院2016级硕士研究生.E-mail:940378713@qq.com

通信作者:
曹贞洁(1991-),女,博士后.研究方向:水生生物病害防治及免疫.E-mail:1057319886@qq.com

周永灿(1968-),男,教授,博导.研究方向:水生生物病害防治及免疫.E-mail:zychnu@163.com

中图分类号: Q78;S917.4

Purification of Serum IgM from Trachinotus ovatus and Preparation of Mouse Sera Anti-IgM

Ocean College, Hainan University/Hainan UniversityHainan Provincial Key Laboratory for Tropical Hydrobiology and Biotechnology/State Key Laboratory of Marine Resource Utilization in South China Sea/, Haikou, Hainan 570228

摘要: 为了获得卵形鲳鲹血清免疫球蛋白(Ig M),笔者首先采用硫酸铵二次盐析法对Ig M进行粗提,然后利用蛋白A亲和层析法进行纯化,并以纯化后的Ig M蛋白为抗原,制备该蛋白的多克隆抗体,最后利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Western blot技术检测所获抗血清的效价及效果。结果表明:用饱和硫酸铵二次盐析法提取的蛋白除了重链和轻链2条电泳带外,杂蛋白较多;利用蛋白A亲和层析法可获得纯度较高的Ig M重链和轻链。用纯化的卵形鲳鲹Ig M免疫小鼠,ELISA方法检测获得的多抗血清效价高达1∶25 600。Western blot结果显示,本实验制备的鼠抗卵形鲳鲹Ig M血清可结合显示出目标条带,说明卵形鲳鲹Ig M多克隆抗血清制备成功,为卵形鲳鲹的后续研究工作奠定了基础。
- 卵形鲳鲹 /
- 蛋白A亲和层析法 /
- 免疫球蛋白IgM /
- 多克隆抗体
Abstract: Immunoglobulin M（ IgM） was isolated from the serum of Trachinotus ovatusby using ammonium sulfate fractionation and then purified by using Protein A-sepharose affinity chromatography. Furthermore,the purified IgM product was used to prepare a polyclonal antibody. In addition,the titer and specificity of the polyclonal antibody were analyzed by the ELISA and the Western blot,respectively. The results showed that the ammonium sulfate fractionation precipitated most proteins from the sera of T. ovatus,but the IgM proteins with heavy and light chains were crude with some heteroproteins. Furthermore,the IgM product purified by the Protein A-sepharose affinity chromatography possessed two obvious bands（ heavy chain and light chain）. Moreover,the prepared anti-sera had a high titer of 1 ∶ 25 600 when assayed by the ELISA. The Western blot analysis showed that the IgM polyclonal antibody of T. ovatus contained the target bands,indicating the IgM polyclonal antibody was prepared successfully and could be used in correlation analysis in the coming future.
- Trachinotus ovatus /
- protein A-sepharose affinity chromatography /
- immunoglobulin M（IgM） /
- polyclonal antibody

[1]	赵志浩, 王倩男. 胶孢炭疽菌羧肽酶Y抑制蛋白CgPEB的功能初探 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-11. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250016
[2]	张博文, 徐浩然, 曾鸿秋. MeJAZ2.2基因的克隆及互作蛋白筛选 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-10. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240169
[3]	吴竞远, 唐璐芝, 朱彬彬, 赵惠萍. 木薯生长素响应因子MeARF的克隆及互作蛋白的筛选 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-9. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240148
[4]	赵阳, 刘爽, 王志彪, 伍俊宇, 陈代朋, 郑丽. 香蕉枯萎病菌候选效应蛋白FoSSP80能抑制植物免疫反应 . 热带生物学报, 2025, 16(1): 87-97. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240019
[5]	谭梦婷, 徐浩然, 曾鸿秋. MeDAWDLE基因的克隆和蛋白功能验证 . 热带生物学报, 2025, 16(3): 370-378. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240146
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[9]	金柳, 李萌晗, 郑育声, 李东栋. 油棕乙酰基酰基载体蛋白硫酯酶EgFATA基因的克隆与功能分析 . 热带生物学报, 2023, 14(4): 357-363. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2023.04.002
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[14]	林川, 何永姑, 王小兵. 卵形鲳鲹深海网箱养殖渔获模式的研究 . 热带生物学报, 2018, 9(4): 363-369. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.001
[15]	林川, 王小兵, 黄海. 卵形鲳鲹鱼种大型网箱阶梯式中间培育技术 . 热带生物学报, 2017, 8(4): 383-389. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.04.002
[16]	孙勇, 王丹, 仝征, 常丽丽, 王力敏, 王旭初. 植物糖基化蛋白质组研究技术策略及研究进展 . 热带生物学报, 2016, 7(3): 402-408. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.022
[17]	耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体 . 热带生物学报, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016
[18]	贺瑞, 彭赟, 刘扬, 曾灿彬, 徐敏, 齐钊, 闫臻, 骆娟, 阮云泽, 何朝族, 汤华. 低氮胁迫下香蕉硝酸盐转运蛋白MaNRT2基因的克隆与表达分析 . 热带生物学报, 2016, 7(1): 76-81. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.013
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[20]	肖华, 林云蒸, 姚笛, 欧阳沫, 黄惜. 巴西橡胶树锌指蛋白基因的克隆及功能鉴定 . 热带生物学报, 2015, 6(2): 113-118. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.02.002

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卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

海南大学海洋学院/海南省热带水生生物技术重点实验室/海南省南海海洋资源利用国家重点实验室, 海口 570228

基金项目:

海南省博士后科学基金(BSH-RST-2018001)

海南省重大项目(ZDKJ2016011))

国家自然科学基金项目(31702379,31560725)

作者简介:
张胜楠(1992-),女,海南大学海洋学院2016级硕士研究生.E-mail:940378713@qq.com

通讯作者: 曹贞洁(1991-),女,博士后.研究方向:水生生物病害防治及免疫.E-mail:1057319886@qq.com; 周永灿(1968-),男,教授,博导.研究方向:水生生物病害防治及免疫.E-mail:zychnu@163.com

收稿日期: 2018-09-10
修回日期: 2018-10-18

中图分类号: Q78;S917.4

关键词:

蛋白A亲和层析法 /

免疫球蛋白IgM /

多克隆抗体

摘要: 为了获得卵形鲳鲹血清免疫球蛋白(Ig M),笔者首先采用硫酸铵二次盐析法对Ig M进行粗提,然后利用蛋白A亲和层析法进行纯化,并以纯化后的Ig M蛋白为抗原,制备该蛋白的多克隆抗体,最后利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Western blot技术检测所获抗血清的效价及效果。结果表明:用饱和硫酸铵二次盐析法提取的蛋白除了重链和轻链2条电泳带外,杂蛋白较多;利用蛋白A亲和层析法可获得纯度较高的Ig M重链和轻链。用纯化的卵形鲳鲹Ig M免疫小鼠,ELISA方法检测获得的多抗血清效价高达1∶25 600。Western blot结果显示,本实验制备的鼠抗卵形鲳鲹Ig M血清可结合显示出目标条带,说明卵形鲳鲹Ig M多克隆抗血清制备成功,为卵形鲳鲹的后续研究工作奠定了基础。

English Abstract

张胜楠, 吴莹, 孙云, 曹贞洁, 周永灿. 卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备[J]. 热带生物学报, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

引用本文:

张胜楠, 吴莹, 孙云, 曹贞洁, 周永灿. 卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备[J]. 热带生物学报, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

ZHANG Shengnan, WU Ying, SUN Yun, Cao Zhenjie, ZHOU Yongcan. Purification of Serum IgM from Trachinotus ovatus and Preparation of Mouse Sera Anti-IgM[J]. Journal of Tropical Biology, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

Citation:

ZHANG Shengnan, WU Ying, SUN Yun, Cao Zhenjie, ZHOU Yongcan. Purification of Serum IgM from Trachinotus ovatus and Preparation of Mouse Sera Anti-IgM[J]. Journal of Tropical Biology, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002

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