利用毒素蛋白基因<i>ccdB</i>构建高效低背景T-载体

耿晓姗; 刘秦; 党会杰; 武军政; 罗丽娟

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

《中国科技核心期刊》数据库收录期刊
《中国学术期刊（光盘版）》全文收录期刊
《中文科技期刊数据库》收录期刊
《美国乌利希国际期刊指南（Ulrichsweb）》数据库收录期刊

高级检索

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟

文章导航 > 热带生物学报 > 2016 > 7(2): 232-236

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体[J]. 热带生物学报, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

引用本文:

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体[J]. 热带生物学报, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

GENG Xiaoshan, LIU Qin, DANG Huijie, WU Junzheng, LUO Lijuan. Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

Citation:

GENG Xiaoshan, LIU Qin, DANG Huijie, WU Junzheng, LUO Lijuan. Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

1. 海南大学农学院, 海口 570228;
2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

基金项目:

“木薯和橡胶糖代谢、耐贫瘠和抗病抗理”项目(ZXBJH-XK001)

海南大学优秀研究生学位论文培育计划(M8K3124001003002)

国家自然科学基金(31360575)

详细信息

第一作者:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者:
罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

中图分类号: Q782

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;
2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

摘要: 高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。
- 高效 /
- 低背景 /
- ccdB基因 /
- pMD19-T Simple Vector /
- T-载体
Abstract: A simple and effective method for construction of the T-vector with high efficiency and low background was developed under the universal conditions in laboratory for improving the efficiency of PCR products cloning.The ccdB gene fragment containing restriction enzyme cleavage site was inserted as a medium DNA to the vector backbone p MD19-T Simple. The recombinant plasmid was confirmed by PCR identification,digestion pattern and sequencing,and the recombinant plasmid can then produce a liner T-vector by Xcm I restriction enzyme digestion. This T-vector reduced the background interference of vector self-ligation,and improved the efficiency of T-A cloning with high positive cloning rate. The vector had not only high efficiency and low background but also many advantages of p MD19-T Simple vector,and its preparation was quite simple and convenient for molecular cloning.
- high efficiency /
- low background /
- ccdB gene /
- pMD19-T Simple Vector /
- T-vector

[1]	王鹏, 怀志文, 刘子涵, 雷鹏, 耿晓晓. 水椰幼苗适应低光照环境的生理响应及转录组差异变化的研究 . 热带生物学报, 2025, 16(3): 464-471. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240114
[2]	符春婵, 胡旭, 林佳奇, 马梦欣, 王晓椿, 王志勇, 廖丽. 海雀稗低氮耐受性指标筛选及综合评价 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-9. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240191
[3]	刘小丽, 韦运谢. 木薯MeAux/IAA19基因的克隆及功能初探 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240145
[4]	董晨, 郑雪文, 王弋, 全振炫, 李伟才. 荔枝GRF基因家族的全基因组鉴定及表达分析 . 热带生物学报, 2024, 15(2): 190-197. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230099
[5]	巫惠玲, 向文倩, 陈元君, 任明迅. 木棉稻田农林复合系统传统技艺对当代热带特色高效农业创新模式的启示 . 热带生物学报, 2024, 15(6): 800-811. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240107
[6]	金柳, 李萌晗, 郑育声, 李东栋. 油棕乙酰基酰基载体蛋白硫酯酶EgFATA基因的克隆与功能分析 . 热带生物学报, 2023, 14(4): 357-363. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2023.04.002
[7]	刘之洋, 刘静, 宁宇, 戚仁洁, 徐海, 陈龙正. 基于Fast-Tracc方式建立苦瓜高效遗传转化体系的研究 . 热带生物学报, 2023, 14(6): 622-627. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230082
[8]	张忠辉, 邓渊, 强奇, 陈日东, 杨君, 刘贤青, 王守创, 袁潜华, 罗杰, 罗越华. 基于高效液相色谱-质谱联用技术解析山栏稻营养品质的代谢物谱 . 热带生物学报, 2021, 12(4): 419-427. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.04.003
[9]	费小雯, 张阳, 李亚军, 邓晓东. 伊蚊3HKT基因RNAi载体构建及口服对伊蚊的致死作用 . 热带生物学报, 2021, 12(3): 356-362. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.03.012
[10]	谢媚, 杨艺滢, 陈偿. 溶珊瑚弧菌hapR基因的敲除及功能研究 . 热带生物学报, 2020, 11(3): 266-273. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.03.002
[11]	曹欣, 唐燕琼, 李宏, 马香, 刘柱. Flag-ALD融合载体构建及蛋白表达 . 热带生物学报, 2020, 11(2): 132-137, 155. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.002
[12]	李小北, 田少卿, 黄崇利. 自贸港背景下海南生态渔港的综合评价模型 . 热带生物学报, 2020, 11(4): 507-516. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.04.014
[13]	任宁, 陈秀珍, 夏幽泉, 白雪杨, 江行玉, 周扬. 木薯MeNRT2.5基因的克隆及表达分析 . 热带生物学报, 2019, 10(2): 111-118. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.003
[14]	张腾云, 徐文, 张鸣姗, 赵洪伟. 超高效液相色谱-串联质谱法检测东寨港海水中磺胺类药物残留 . 热带生物学报, 2019, 10(2): 197-203. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.016
[15]	武新丽, 韦双双, 裴业春, 赵景锋, 王大勇. 反相高效液相色谱法对小鼠血清中基因重组人促肾上腺皮质激素前体及其代谢物的测定 . 热带生物学报, 2019, 10(1): 83-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.01.014
[16]	贺瑞, 彭赟, 刘扬, 曾灿彬, 徐敏, 齐钊, 闫臻, 骆娟, 阮云泽, 何朝族, 汤华. 低氮胁迫下香蕉硝酸盐转运蛋白MaNRT2基因的克隆与表达分析 . 热带生物学报, 2016, 7(1): 76-81. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.013
[17]	张长正, 刘进平, 时涛, 李超萍, 陈奕鹏, 黄贵修. 木薯地毯草黄单胞菌转化子T-DNA插入模式分析 . 热带生物学报, 2016, 7(2): 246-252. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.018
[18]	张振文, 简纯平, 林立铭, 姚庆群, 李开绵. 低场核磁共振技术在木薯种茎低温贮藏中的运用 . 热带生物学报, 2015, 6(3): 329-334. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.019
[19]	洪灏, 刘小婷, 肖华, 黄惜, 袁红梅. HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选 . 热带生物学报, 2015, 6(3): 256-260. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006
[20]	. 热带地区蔬菜种质创新与高效栽培团队简介 . 热带生物学报, 2015, 6(3): 226-226.

点击查看大图

计量

文章访问数: 2
HTML全文浏览量: 0
PDF下载量: 0
被引次数: 0

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

1. 海南大学农学院, 海口 570228;

2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

基金项目:

“木薯和橡胶糖代谢、耐贫瘠和抗病抗理”项目(ZXBJH-XK001)

海南大学优秀研究生学位论文培育计划(M8K3124001003002)

国家自然科学基金(31360575)

作者简介:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通讯作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

收稿日期: 2016-01-15

中图分类号: Q782

关键词:

高效 /

低背景 /

ccdB基因 /

pMD19-T Simple Vector /

T-载体

摘要: 高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。

English Abstract

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体[J]. 热带生物学报, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

引用本文:

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体[J]. 热带生物学报, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

Citation:

全文HTML

下载: 全尺寸图片幻灯片

返回文章

用微信扫码二维码

分享至好友和朋友圈

x 关闭永久关闭

《热带生物学报》编辑部参与2025年热区高校联盟年会

留言板

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

第一作者:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者:
罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

计量

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

1. 海南大学农学院, 海口 570228;

2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

作者简介:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通讯作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

English Abstract

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;

2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

全文HTML

目录

留言板

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

第一作者: 耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

计量

出版历程

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

1. 海南大学农学院, 海口 570228; 2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

作者简介: 耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通讯作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

English Abstract

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China; 2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

全文HTML

目录

第一作者:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者:
罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

1. 海南大学农学院, 海口 570228;

2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

作者简介:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;

2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China