利用毒素蛋白基因<i>ccdB</i>构建高效低背景T-载体

耿晓姗; 刘秦; 党会杰; 武军政; 罗丽娟

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

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利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟

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耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体[J]. 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

引用本文:

耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体[J]. 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

GENG Xiaoshan, LIU Qin, DANG Huijie, WU Junzheng, LUO Lijuan. Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

Citation:

GENG Xiaoshan, LIU Qin, DANG Huijie, WU Junzheng, LUO Lijuan. Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

1. 海南大学农学院, 海口 570228;
2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

基金项目:

“木薯和橡胶糖代谢、耐贫瘠和抗病抗理”项目(ZXBJH-XK001)

海南大学优秀研究生学位论文培育计划(M8K3124001003002)

国家自然科学基金(31360575)

详细信息

第一作者:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者:
罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

中图分类号: Q782

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;
2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

摘要: 高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。
- 高效 /
- 低背景 /
- ccdB基因 /
- pMD19-T Simple Vector /
- T-载体
Abstract: A simple and effective method for construction of the T-vector with high efficiency and low background was developed under the universal conditions in laboratory for improving the efficiency of PCR products cloning.The ccdB gene fragment containing restriction enzyme cleavage site was inserted as a medium DNA to the vector backbone p MD19-T Simple. The recombinant plasmid was confirmed by PCR identification,digestion pattern and sequencing,and the recombinant plasmid can then produce a liner T-vector by Xcm I restriction enzyme digestion. This T-vector reduced the background interference of vector self-ligation,and improved the efficiency of T-A cloning with high positive cloning rate. The vector had not only high efficiency and low background but also many advantages of p MD19-T Simple vector,and its preparation was quite simple and convenient for molecular cloning.
- high efficiency /
- low background /
- ccdB gene /
- pMD19-T Simple Vector /
- T-vector

[1]	周斌, 张月青, 杨兴梅, 叶政培, 陈俊谕, 符悦冠, 朱俊洪, 张方平. 对大洋臀纹粉蚧高效、对孟氏隐唇瓢虫安全的化学药剂筛选 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(): 1-8. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250189
[2]	巫惠玲, 向文倩, 陈元君, 任明迅. 木棉稻田农林复合系统传统技艺对当代热带特色高效农业创新模式的启示 . 热带生物学报（中英文）, 2024, 15(6): 800-811. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240107
[3]	刘之洋, 刘静, 宁宇, 戚仁洁, 徐海, 陈龙正. 基于Fast-Tracc方式建立苦瓜高效遗传转化体系的研究 . 热带生物学报（中英文）, 2023, 14(6): 622-627. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230082
[4]	张忠辉, 邓渊, 强奇, 陈日东, 杨君, 刘贤青, 王守创, 袁潜华, 罗杰, 罗越华. 基于高效液相色谱-质谱联用技术解析山栏稻营养品质的代谢物谱 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(4): 419-427. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.04.003
[5]	费小雯, 张阳, 李亚军, 邓晓东. 伊蚊3HKT基因RNAi载体构建及口服对伊蚊的致死作用 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(3): 356-362. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.03.012
[6]	张腾云, 徐文, 张鸣姗, 赵洪伟. 超高效液相色谱-串联质谱法检测东寨港海水中磺胺类药物残留 . 热带生物学报（中英文）, 2019, 10(2): 197-203. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.016
[7]	武新丽, 韦双双, 裴业春, 赵景锋, 王大勇. 反相高效液相色谱法对小鼠血清中基因重组人促肾上腺皮质激素前体及其代谢物的测定 . 热带生物学报（中英文）, 2019, 10(1): 83-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.01.014
[8]	王晓哲, 肖正泮, 韦双双, 王大勇, 裴业春. 利用DNAStar软件预测热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的抗原表位 . 热带生物学报（中英文）, 2017, 8(1): 107-112. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.01.017
[9]	肖正泮, 刘金莹, 韦双双, 王大勇, 裴业春. 重组热带螨Blo t 21变应原诱导小鼠变态反应气道炎症模型的建立 . 热带生物学报（中英文）, 2017, 8(3): 371-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.03.020
[10]	贺瑞, 彭赟, 刘扬, 曾灿彬, 徐敏, 齐钊, 闫臻, 骆娟, 阮云泽, 何朝族, 汤华. 低氮胁迫下香蕉硝酸盐转运蛋白MaNRT2基因的克隆与表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(1): 76-81. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.013
[11]	张长正, 刘进平, 时涛, 李超萍, 陈奕鹏, 黄贵修. 木薯地毯草黄单胞菌转化子T-DNA插入模式分析 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(2): 246-252. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.018
[12]	. 热带地区蔬菜种质创新与高效栽培团队简介 . 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(3): 226-226.
[13]	龚付全, 李平华. 玉米自交系B73丙酮酸磷酸双激酶基因的克隆及低氮对PPDK表达的影响 . 热带生物学报（中英文）, 2014, 5(4): 326-333. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2014.04.004
[14]	赵天勤, 杜杰, 金春阳, 操风, 潘彦鹏, 曹献英. 聚赖氨酸接枝淀粉共聚物的制备及其作为基因载体的研究 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(2): 138-145. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.02.004
[15]	訾亮, 洪灏, 翟金玲, 马穗, 黄惜. 拟南芥NiNJA基因酵母双杂诱饵载体构建及互作蛋白的筛选 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(1): 31-35. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.01.002
[16]	刘长仁, 刘伟, 翟金玲, 訾亮, 黄惜. 拟南芥AtGRP7基因诱饵载体的构建及酵母双杂的初筛 . 热带生物学报（中英文）, 2012, 3(2): 121-125. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.02.002
[17]	陈瑶, 沈文涛, 言普, 黎小瑛, 周鹏. 番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 113-116. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.006
[18]	武媛丽, 杨本鹏, 蔡文伟, 张树珍. 利用高效液相色谱法测定转基因甘蔗中的低聚果糖 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 101-106. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.008
[19]	林生, 潘大仁, 周以飞, 陈观水, 张绪璋, 吴子峰. 果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010
[20]	夏志辉, 董军美, 罗越华. 利用限制性内切酶Xc mⅠ构建T载体 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(3): 206-209. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.002

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利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016

1. 海南大学农学院, 海口 570228;

2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

基金项目:

“木薯和橡胶糖代谢、耐贫瘠和抗病抗理”项目(ZXBJH-XK001)

海南大学优秀研究生学位论文培育计划(M8K3124001003002)

国家自然科学基金(31360575)

作者简介:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通讯作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

收稿日期: 2016-01-15

中图分类号: Q782

关键词:

高效 /

低背景 /

ccdB基因 /

pMD19-T Simple Vector /

T-载体

摘要: 高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。

English Abstract

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第一作者:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者:
罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

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2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

作者简介:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通讯作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

English Abstract

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;

2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

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通信作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

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作者简介: 耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通讯作者: 罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

English Abstract

Construction of T-Vector with High Efficiency and Low Background based on the ccdB Killer Gene

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China; 2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

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耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

通信作者:
罗丽娟(1964-),女,教授.研究方向:植物学.E-mail:Luoljd@126.com

1. 海南大学农学院, 海口 570228;

2. 海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地, 海口 570228

作者简介:
耿晓姗(1988-),女,海南大学农学院2013级在读硕士研究生.E-mail:1005871997@qq.com

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;

2. Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China