果蔗<i>SoSgt</i>1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建

林生; 潘大仁; 周以飞; 陈观水; 张绪璋; 吴子峰

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

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果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建

林生, 潘大仁, 周以飞, 陈观水, 张绪璋, 吴子峰

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林生, 潘大仁, 周以飞, 陈观水, 张绪璋, 吴子峰. 果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建[J]. 热带生物学报, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

引用本文:

林生, 潘大仁, 周以飞, 陈观水, 张绪璋, 吴子峰. 果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建[J]. 热带生物学报, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

LIN Sheng, PAN Da-ren, ZHOU Yi-fei, CHEN Guan-shui, ZHANG Xu-zhang, WU Zi-feng. Cloning of SoSgt1 from Chewing Cane and Construction of Antisense Vector[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

Citation:

LIN Sheng, PAN Da-ren, ZHOU Yi-fei, CHEN Guan-shui, ZHANG Xu-zhang, WU Zi-feng. Cloning of SoSgt1 from Chewing Cane and Construction of Antisense Vector[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

林生^1,2,
潘大仁^1,2, ,,
周以飞^1,2,
陈观水¹,
张绪璋²,
吴子峰¹

1. 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002;
2. 作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002

基金项目:

福建省自然科学基金(2003N001)

国家自然科学基金(30370900)

详细信息

第一作者:
林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通信作者:
潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

中图分类号: Q781

Cloning of SoSgt1 from Chewing Cane and Construction of Antisense Vector

1. Key Laboratory of Crop Molecular and Cell Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China;
2. Key Laboratory of Ministry of Education of Genetics, Breeding and Multiple Utilization of Crops, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China

摘要: 利用不同作物的Sgt1基因的SGS保守区域的氨基酸保守位点设计简并引物,从果蔗的cDNA中克隆分离出果蔗SoSgt1基因片段。以果蔗SoSgt1基因片段为探针,利用电子克隆和序列拼接方法并通过RT-PCR验证获得了一个全长1438bp的cDNA序列。通过ORF软件分析,预测得到的蛋白质具有362个氨基酸。利用NCBI数据库中的Protein Blast分析SoSgt1蛋白氨基酸序列,得出含有SGT1蛋白的3个典型的保守结构域(TPR,CS和SGS),与其他作物的SGT1蛋白比较具有较高的相似性。利用梢腐病病原Gibberella fujikuroi接种福安果蔗叶片,检测到SoSgt基因的转录水平逐渐提高,并用果蔗SoSgt基因的cDNA片段设计2个酶切位点,反向插入到植物真核表达载体pCAMBIA1301,构建反义表达载体pCAM-SGT。
- 果蔗 /
- SoSgt1基因 /
- 克隆 /
- 半定量RT-PCR /
- 载体构建
Abstract: Based on SGS conservative amino acid region of Sgt1 gene from different crops,degenerate primers were designed and RT-PCR was used to amplify SoSgt1 cDNA fragment of chewing cane. The results indicated thatSoSgt1 full length cDNA from chewing cane includes 1438 bp,362 amino acids. Protein Blast from NCBI database was used to analysis its amino acid sequence,and the results showed that the SoSgt1 protein have three SGT1 typical conserved domains eg. TPR,CS and SGS,and the similarity among SGT1 of other crops were very high. The expression levels ofSoSgt1 increased after inoculating with Gibberella fujikuroi. Based on SoSgt1 cDNA ,two restriction sites were designed and antisense expression vector pCAM-SGT were constructed,in which plant eukaryotic expression vector,pCAMBIA1301,were used as backbone.
- chewing cane /
- SoSgt1 gene /
- cloning /
- semi-quantitative RT-PCR /
- vector construction

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[3]	符丹凤, 刘洪涛, 杨明秋, 何玉贵. 斑节对虾PmML1和PmML2基因的鉴定及表达分析 . 热带生物学报, 2022, 13(5): 440-450. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2022.05.003
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果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

1. 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002;

2. 作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002

基金项目:

福建省自然科学基金(2003N001)

国家自然科学基金(30370900)

作者简介:
林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通讯作者: 潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

收稿日期: 2009-10-10

中图分类号: Q781

关键词:

果蔗 /

SoSgt1基因 /

克隆 /

半定量RT-PCR /

载体构建

摘要: 利用不同作物的Sgt1基因的SGS保守区域的氨基酸保守位点设计简并引物,从果蔗的cDNA中克隆分离出果蔗SoSgt1基因片段。以果蔗SoSgt1基因片段为探针,利用电子克隆和序列拼接方法并通过RT-PCR验证获得了一个全长1438bp的cDNA序列。通过ORF软件分析,预测得到的蛋白质具有362个氨基酸。利用NCBI数据库中的Protein Blast分析SoSgt1蛋白氨基酸序列,得出含有SGT1蛋白的3个典型的保守结构域(TPR,CS和SGS),与其他作物的SGT1蛋白比较具有较高的相似性。利用梢腐病病原Gibberella fujikuroi接种福安果蔗叶片,检测到SoSgt基因的转录水平逐渐提高,并用果蔗SoSgt基因的cDNA片段设计2个酶切位点,反向插入到植物真核表达载体pCAMBIA1301,构建反义表达载体pCAM-SGT。

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doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

第一作者:
林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通信作者:
潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

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1. 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002;

2. 作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002

作者简介:
林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通讯作者: 潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

English Abstract

Cloning of SoSgt1 from Chewing Cane and Construction of Antisense Vector

1. Key Laboratory of Crop Molecular and Cell Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China;

2. Key Laboratory of Ministry of Education of Genetics, Breeding and Multiple Utilization of Crops, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China

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第一作者: 林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通信作者: 潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

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doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

1. 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室 福建农林大学, 福建 福州 350002; 2. 作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室 福建农林大学, 福建 福州 350002

作者简介: 林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通讯作者: 潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

English Abstract

Cloning of SoSgt1 from Chewing Cane and Construction of Antisense Vector

1. Key Laboratory of Crop Molecular and Cell Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China; 2. Key Laboratory of Ministry of Education of Genetics, Breeding and Multiple Utilization of Crops, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China

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第一作者:
林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

通信作者:
潘大仁，博士，教授，E-mail：pandaren@163.com.cn

1. 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002;

2. 作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福建农林大学, 福建福州 350002

作者简介:
林生(1981-),男,福建莆田人,福建农林大学2007级在读博士生.

1. Key Laboratory of Crop Molecular and Cell Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China;

2. Key Laboratory of Ministry of Education of Genetics, Breeding and Multiple Utilization of Crops, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China