<i>HbCoi</i>1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

洪灏; 刘小婷; 肖华; 黄惜; 袁红梅

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

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HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

洪灏, 刘小婷, 肖华, 黄惜, 袁红梅

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洪灏, 刘小婷, 肖华, 黄惜, 袁红梅. HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选[J]. 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(3): 256-260. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

引用本文:

洪灏, 刘小婷, 肖华, 黄惜, 袁红梅. HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选[J]. 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(3): 256-260. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

HONG Hao, LIU Xiaoting, XIAO Hua, HUANG Xi, YUAN Hongmei. Construction of Yeast-one-hybrid Bait Vector and Screening of Interacted Proteins of HbCoi1[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(3): 256-260. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

Citation:

HONG Hao, LIU Xiaoting, XIAO Hua, HUANG Xi, YUAN Hongmei. Construction of Yeast-one-hybrid Bait Vector and Screening of Interacted Proteins of HbCoi1[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(3): 256-260. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

海南大学农学院/热带生物资源教育部重点实验室/生物科学技术研究所, 海南海口 570228

基金项目:

海南省科技项目(ZDZX2013023)

国家自然科学基金(31370608

31260170)

详细信息

第一作者:
洪灏(1986-),海南大学农学院2011级硕士研究生.E-mail:hhyatbst@hotmail.com

通信作者:
袁红梅,女,讲师.E-mail:yuanhongmei618@163.com

中图分类号: Q946.1

Construction of Yeast-one-hybrid Bait Vector and Screening of Interacted Proteins of HbCoi1

College of Agronomy, Hainan University/Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Haikou 570228, China

摘要: 茉莉酸是调节天然橡胶树产胶的主要激素,HbCoi1是茉莉酸信号的受体,研究HbCoi1基因的表达调控对了解橡胶树的产胶机理具有重要的意义。首先PCR扩增HbCoi1基因的启动子,然后将目标序列插入pHis2.1载体,构建酵母单杂诱饵载体。将该载体转入酵母Y187菌株感受态中,在缺失培养基上检测自转录激活,发现HbCoi1基因的启动子在3-AT浓度为10 mmol·L^-1时自转录激活得到有效抑制。在此基础上,通过与橡胶cDNA文库进行酵母单杂筛选,得到了几个可能与Hbcoi1启动子发生互作的基因,其中包括DNA结合蛋白、核糖体蛋白和功能未知基因,旨在为深入研究Hbcoi1基因表达调控打下基础。
- HbCoi1 /
- pHIS载体 /
- 自转录激活 /
- 酵母单杂
Abstract: Jasmonic acid（JA） is one of the most important phytohormones for regulation of latex biosynthesis in Hevea brasiliensis. HbCoi1 is the receptor of JA signaling pathway. Analysis of the gene expression of HbCoi1 is of great significance to reveal molecular mechanism of latex biosynthesis in H. brasiliensis. In this context,the promoter of HbCoi1 was PCR amplified and inserted into pHis2. 1 vector to construct bait vector p HIS-HbCoi1 for yeast-one-hybrid. The vector was then transformed into Y187 yeast strain and cultured on the SD medium to test the auto-activity of the transcription. The growth of the strain containing bait vector was inhibited on the SD medium added with 10 mmol·L^-1 3-AT. Furthermore,p HIS-HbCoi1 vector and p GADT7-rec2 cDNA library of H.brasiliensis were co-transformed into Y187 strain,and several proteins interacted with HbCoi1 promoter were identified,including DNA binding protein,ribosomal proteins and uncharacterized proteins,which lays a foundation for further study of gene expression of HbCoi1.
- HbCoi1 /
- pHIS vector /
- auto-activation /
- yeast-one-hybrid

[1]	郑雨, 程潇, 程科, 赵惠萍. 木薯RLK1候选互作蛋白筛选及其与BSK互作的酵母验证 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(2): 223-232. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240187
[2]	高雪, 劳广术, 谭峥, 方渝凯, 刘文波, 靳鹏飞, 缪卫国. 贝莱斯芽孢杆菌HN-2次生代谢产物处理下黄单胞菌（Xoo）的转录组分析 . 热带生物学报（中英文）, 2023, 14(4): 389-398. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2023.04.006
[3]	费小雯, 张阳, 李亚军, 邓晓东. 伊蚊3HKT基因RNAi载体构建及口服对伊蚊的致死作用 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(3): 356-362. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.03.012
[4]	盛强龙, 徐一轲, 刘超伦, 李宏, 马香, 唐燕琼, 刘柱. 维氏气单胞菌ΔexsA1减毒株对宿主免疫原性研究 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(2): 154-160. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.02.003
[5]	曹欣, 唐燕琼, 李宏, 马香, 刘柱. Flag-ALD融合载体构建及蛋白表达 . 热带生物学报（中英文）, 2020, 11(2): 132-137, 155. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.002
[6]	张钰, 林茂娟, 李婷, 李春霞, 陈银华, 陶均. 转录调节因子VrhR负调控野油菜黄单胞菌的致病力 . 热带生物学报（中英文）, 2020, 11(2): 217-222, 237. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.012
[7]	郝慧, 曹玉鑫, 翟金玲, 黄惜. 巴西橡胶树HbNAC1转录因子互作顺式作用元件的筛选 . 热带生物学报（中英文）, 2017, 8(2): 141-146. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.002
[8]	耿晓姗, 刘秦, 党会杰, 武军政, 罗丽娟. 利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(2): 232-236. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.016
[9]	高云慨, 张荣意, 钟利文, 宋海超, 史学群. 1株新分离拮抗酵母菌株对芒果炭疽病生防效果及其分类鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(1): 47-52. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.01.007
[10]	肖华, 林云蒸, 姚笛, 欧阳沫, 黄惜. 巴西橡胶树锌指蛋白基因的克隆及功能鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(2): 113-118. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.02.002
[11]	赵天勤, 杜杰, 金春阳, 操风, 潘彦鹏, 曹献英. 聚赖氨酸接枝淀粉共聚物的制备及其作为基因载体的研究 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(2): 138-145. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.02.004
[12]	曹玉鑫, 花龙, 赵天龙, 李明容, 夏志辉. Xa21全生育期表达载体的构建 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(2): 133-137,145. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.02.001
[13]	吴伦英, 景晓辉, 沈雁. 类转录激活因子效应物及其在生物技术领域的应用 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(4): 386-392. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.04.008
[14]	訾亮, 洪灏, 翟金玲, 马穗, 黄惜. 拟南芥NiNJA基因酵母双杂诱饵载体构建及互作蛋白的筛选 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(1): 31-35. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.01.002
[15]	刘长仁, 刘伟, 翟金玲, 訾亮, 黄惜. 拟南芥AtGRP7基因诱饵载体的构建及酵母双杂的初筛 . 热带生物学报（中英文）, 2012, 3(2): 121-125. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.02.002
[16]	陈瑶, 沈文涛, 言普, 黎小瑛, 周鹏. 番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 113-116. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.006
[17]	夏志辉, 董军美, 罗越华. 利用限制性内切酶Xc mⅠ构建T载体 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(3): 206-209. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.002
[18]	林生, 潘大仁, 周以飞, 陈观水, 张绪璋, 吴子峰. 果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010
[19]	秦云霞, 戚继艳, 唐朝荣. 橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(4): 314-320. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015
[20]	吴金燕, 言普, 沈文涛, 周鹏. 番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

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HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

海南大学农学院/热带生物资源教育部重点实验室/生物科学技术研究所, 海南海口 570228

基金项目:

海南省科技项目(ZDZX2013023)

国家自然科学基金(31370608

31260170)

作者简介:
洪灏(1986-),海南大学农学院2011级硕士研究生.E-mail:hhyatbst@hotmail.com

通讯作者: 袁红梅,女,讲师.E-mail:yuanhongmei618@163.com

收稿日期: 2014-07-15

中图分类号: Q946.1

关键词:

HbCoi1 /

pHIS载体 /

自转录激活 /

酵母单杂

摘要: 茉莉酸是调节天然橡胶树产胶的主要激素,HbCoi1是茉莉酸信号的受体,研究HbCoi1基因的表达调控对了解橡胶树的产胶机理具有重要的意义。首先PCR扩增HbCoi1基因的启动子,然后将目标序列插入pHis2.1载体,构建酵母单杂诱饵载体。将该载体转入酵母Y187菌株感受态中,在缺失培养基上检测自转录激活,发现HbCoi1基因的启动子在3-AT浓度为10 mmol·L^-1时自转录激活得到有效抑制。在此基础上,通过与橡胶cDNA文库进行酵母单杂筛选,得到了几个可能与Hbcoi1启动子发生互作的基因,其中包括DNA结合蛋白、核糖体蛋白和功能未知基因,旨在为深入研究Hbcoi1基因表达调控打下基础。

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DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

第一作者: 洪灏(1986-),海南大学农学院2011级硕士研究生.E-mail:hhyatbst@hotmail.com

通信作者: 袁红梅,女,讲师.E-mail:yuanhongmei618@163.com

Construction of Yeast-one-hybrid Bait Vector and Screening of Interacted Proteins of HbCoi1

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HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.006

海南大学农学院/热带生物资源教育部重点实验室/生物科学技术研究所, 海南海口 570228

作者简介: 洪灏(1986-),海南大学农学院2011级硕士研究生.E-mail:hhyatbst@hotmail.com

通讯作者: 袁红梅,女,讲师.E-mail:yuanhongmei618@163.com

English Abstract

Construction of Yeast-one-hybrid Bait Vector and Screening of Interacted Proteins of HbCoi1

College of Agronomy, Hainan University/Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresources, Haikou 570228, China

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第一作者:
洪灏(1986-),海南大学农学院2011级硕士研究生.E-mail:hhyatbst@hotmail.com

通信作者:
袁红梅,女,讲师.E-mail:yuanhongmei618@163.com

作者简介:
洪灏(1986-),海南大学农学院2011级硕士研究生.E-mail:hhyatbst@hotmail.com