海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白<i>PAP-Ⅰ</i>基因的原核表达及活性验证

黄超; 张丽丽; 邓柳红; 张春发

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

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海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证

黄超, 张丽丽, 邓柳红, 张春发

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黄超, 张丽丽, 邓柳红, 张春发. 海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证[J]. 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(1): 82-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

引用本文:

黄超, 张丽丽, 邓柳红, 张春发. 海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证[J]. 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(1): 82-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

HUANG Chao, ZHANG Lili, DENG Liuhong, ZHANG Chunfa. Expression and Identification of Pokeweed Antiviral Protein PAP-Ⅰ Gene in Escherichia coli in Wuzhi Mountain in Hainan Island[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(1): 82-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

Citation:

HUANG Chao, ZHANG Lili, DENG Liuhong, ZHANG Chunfa. Expression and Identification of Pokeweed Antiviral Protein PAP-Ⅰ Gene in Escherichia coli in Wuzhi Mountain in Hainan Island[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(1): 82-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

黄超^1,2,3,
张丽丽²,
邓柳红³,
张春发^2, ,

1. 海南大学农学院, 海南海口, 570228;
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口, 571101;
3. 海南省蛋白质工程药物重点实验室/海口市生命科学药物工程技术研究开发中心, 海南海口, 570311

基金项目:

海南省重大科技项目(ZDZX2013008-04-03)

海口市重点科技计划项目(2012-060)

国家自然科学基金项目(31101200)

详细信息

第一作者:
黄超(1985-),男,海南大学农学院2007级硕士研究生.E-mail:huangchao_sr@163.com

通信作者:
张春发,男,研究员.研究方向:农业生物技术.E-mail:zhangchunfa_sr@163.com

中图分类号: Q786

Expression and Identification of Pokeweed Antiviral Protein PAP-Ⅰ Gene in Escherichia coli in Wuzhi Mountain in Hainan Island

1. College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China;
2. Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou, Hainan 571101, China;
3. Hainan Key Laboratory of Protein Engineering and Drug Development/Haikou Technology Research and Development Center for Life Science Drug Engineering, Haikou, Hainan 570311, China

摘要: 提取春季海南五指山美洲商陆叶片总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,再根据Genbank上公布的PAP-Ⅰ基因序列设计引物扩增PAP-Ⅰ基因,并连接到pET-30a载体上进行表达,表达的产物以不溶的包涵体形式存在,经过变性、镍柱亲和层析纯化,纯化后的重组蛋白经过Western Blot验证表明该基因得到了正确表达,利用柱上循环复性后的重组PAP-Ⅰ蛋白经麦胚提取物转录/翻译偶联系统验证具有抑制蛋白质合成的活性。
- 美洲商陆 /
- 抗病毒蛋白 /
- 载体构建 /
- 原核表达 /
- 海南五指山
Abstract: Total RNA was extracted from pokeweed leaves in spring at Wuzhi Mountain in Hainan,and c DNA was obtained using RT-PCR technology. After the gene PAP-Ⅰ was amplified according to the primers which were designed based on the sequence published on the Genbank. The PAP-Ⅰ gene was connected to the vector pET-30a for expression. The product was in the form of insoluble inclusion body. This product was denatured and purified through nickel column chromatography. The purified recombinant protein was verified by Western Blot,which indicated that the gene was expressed correctly. The recombinant protein PAP-Ⅰ was proved to have the activity to inhibit the protein synthesis through wheat germ extract transcription / translation coupling system.
- pokeweed /
- antiviral protein /
- vector construction /
- prokaryotic expression /
- Wuzhi Mountain

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[2]	丁家辉, 张倩玉, 袁红梅. 橡胶草TkBZR家族基因的鉴定与原核表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(3): 379-389. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250029
[3]	郑伊蒙, 段家文, 张艺, 李晨辉, 谢珍玉, 黄爱优. 三角褐指藻乳酸脱氢酶的原核表达及纯化鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(1): 136-143. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240176
[4]	刘小丽, 韦运谢. 木薯MeAux/IAA19基因的克隆及功能初探 . 热带生物学报（中英文）, 2025, 16(3): 363-369. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240145
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[6]	谭梦婷, 徐浩然, 曾鸿秋. MeDAWDLE基因的克隆和蛋白功能验证 . 热带生物学报（中英文）, 2025, 16(3): 370-378. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240146
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[8]	唐佳, 倪兴振, 邢皓程, 王佑笑, 杨倩曦, 闫智聪, 周智, 赵建民. 鹿角杯形珊瑚溶菌酶PdLYZ重组蛋白的表达及其体外抑菌活性特征 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(2): 139-146. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.02.001
[9]	张伊动, 马香, 李宏, 唐鸿倩, 刘柱, 唐燕琼. 维氏气单胞菌Cbl蛋白的原核表达及纯化 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(3): 333-339. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.03.009
[10]	张转丹, 肖正泮, 武新丽, 孙艳, 罗应, 吴昊, 韦双双, 裴业春, 王大勇. 鱼类神经坏死病毒衣壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN1融合基因的原核表达 . 热带生物学报（中英文）, 2020, 11(2): 145-155. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.004
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[16]	曹玉鑫, 花龙, 赵天龙, 李明容, 夏志辉. Xa21全生育期表达载体的构建 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(2): 133-137,145. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.02.001
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海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

1. 海南大学农学院, 海南海口, 570228;

2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口, 571101;

3. 海南省蛋白质工程药物重点实验室/海口市生命科学药物工程技术研究开发中心, 海南海口, 570311

基金项目:

海南省重大科技项目(ZDZX2013008-04-03)

海口市重点科技计划项目(2012-060)

国家自然科学基金项目(31101200)

作者简介:
黄超(1985-),男,海南大学农学院2007级硕士研究生.E-mail:huangchao_sr@163.com

通讯作者: 张春发,男,研究员.研究方向:农业生物技术.E-mail:zhangchunfa_sr@163.com

收稿日期: 2015-09-11

中图分类号: Q786

关键词:

摘要: 提取春季海南五指山美洲商陆叶片总RNA,利用RT-PCR技术获得c DNA,再根据Genbank上公布的PAP-Ⅰ基因序列设计引物扩增PAP-Ⅰ基因,并连接到pET-30a载体上进行表达,表达的产物以不溶的包涵体形式存在,经过变性、镍柱亲和层析纯化,纯化后的重组蛋白经过Western Blot验证表明该基因得到了正确表达,利用柱上循环复性后的重组PAP-Ⅰ蛋白经麦胚提取物转录/翻译偶联系统验证具有抑制蛋白质合成的活性。

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DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

第一作者: 黄超(1985-),男,海南大学农学院2007级硕士研究生.E-mail:huangchao_sr@163.com

通信作者: 张春发,男,研究员.研究方向:农业生物技术.E-mail:zhangchunfa_sr@163.com

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DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014

1. 海南大学农学院, 海南海口, 570228; 2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口, 571101; 3. 海南省蛋白质工程药物重点实验室/海口市生命科学药物工程技术研究开发中心, 海南海口, 570311

作者简介: 黄超(1985-),男,海南大学农学院2007级硕士研究生.E-mail:huangchao_sr@163.com

通讯作者: 张春发,男,研究员.研究方向:农业生物技术.E-mail:zhangchunfa_sr@163.com

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Expression and Identification of Pokeweed Antiviral Protein PAP-Ⅰ Gene in Escherichia coli in Wuzhi Mountain in Hainan Island

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第一作者:
黄超(1985-),男,海南大学农学院2007级硕士研究生.E-mail:huangchao_sr@163.com

通信作者:
张春发,男,研究员.研究方向:农业生物技术.E-mail:zhangchunfa_sr@163.com

1. 海南大学农学院, 海南海口, 570228;

2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口, 571101;

3. 海南省蛋白质工程药物重点实验室/海口市生命科学药物工程技术研究开发中心, 海南海口, 570311

作者简介:
黄超(1985-),男,海南大学农学院2007级硕士研究生.E-mail:huangchao_sr@163.com