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番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

吴金燕, 言普, 沈文涛, 周鹏

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吴金燕, 言普, 沈文涛, 周鹏. 番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测[J]. 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

引用本文:

吴金燕, 言普, 沈文涛, 周鹏. 番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测[J]. 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

WU Jin-yan, YAN Pu, SHEN Wen-tao, ZHOU Peng. Construction and Autoactivation Identification of Bait Vector Containing Papaya eIF4E and eIFiso4E Gene in Yeast Two Hybrid System[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

Citation:

WU Jin-yan, YAN Pu, SHEN Wen-tao, ZHOU Peng. Construction and Autoactivation Identification of Bait Vector Containing Papaya eIF4E and eIFiso4E Gene in Yeast Two Hybrid System[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

吴金燕^1,2,
言普²,
沈文涛²,
周鹏^1,2, ,

1. 海南大学农学院, 海南海口 570228;
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部热带作物生物技术重点开放实验室, 海南海口 571101

基金项目:

国家自然科学基金项目(30760134)

中央级公益性科研院所基本科研业务费资助项目(ITBBZD0732)

第一作者:
吴金燕（1985－），女，湖南岳阳市人，海南大学农学院，生物化学与分子生物学专业2007级硕士生.

通信作者:
周鹏（1963－），男，研究员／教授，博士生导师，E-mail：zhp6301@126.com Tel.0898－66988564.

中图分类号: S667.9；Q78

Construction and Autoactivation Identification of Bait Vector Containing Papaya eIF4E and eIFiso4E Gene in Yeast Two Hybrid System

WU Jin-yan^1,2,
YAN Pu²,
SHEN Wen-tao²,
ZHOU Peng^{1,2
, ,}

1 School of Agriculture, Hainan University, Haikou 570228, China;
2. Key Laboratory of Tropical Crop Biotechnology, Ministry of Agriculture, Institute of Tropical Bioscience Biotechnology, CATAS, Haikou 571101, China

摘要: 通过RT-PCR获得番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的编码区,将其分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-eIF4E,pBD-GAL4-eIFiso4E。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,获得了正确的番木瓜eIF4E,eIFiso4E基因编码区,并成功克隆到pBD-GAL4诱饵载体中,且转化有诱饵载体的YRG-2在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,在SD/-His-Trp营养缺陷平板上不能生长,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,这为下一步利用酵母双杂交系统检测番木瓜eIF4E,eIFiso4E蛋白与病毒的相互作用奠定了基础。
- 番木瓜 /
- eIF4E /
- eIFiso4E /
- 酵母双杂交 /
- 自激活检测
Abstract: The coding regions of papaya eIF4E and eIFiso4E were amplified by RT-PCR and then fused with pBD-GAL4 vector. After confirmation with sequence analysis,the plasmid was transformed into the yeast cell,YRG-2,and the toxicity and transcriptional autoactivation of expressed protein were tested. The results indicated that the coding regions were successfully amplified and subcloned into pBD-GAL4,and the YRG-2 transformed with bait plasmids grew well on SD/trp plate but not on SD/-his-trp. These data showed that the bait vectors,pBD-GAL4-eIF4E and pBD-GAL4-eIFiso4E,were expressed correctly without toxicity,and could not autoactivate the transcription of reporter gene alone in yeast two hybrid systems,and could be used for analyzing the interaction between papaya eIF4E,eIFiso4E protein and virus.
- papaya /
- eIF4E /
- eIFiso4E /
- yeast two-hybrid /
- activation identification

[1]	梁梦微, 刘国银. 木薯MeCYP71E7基因克隆及功能分析 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(): 1-12. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20260074
[2]	林慧婷, 张宇霆, 赵奥特, 黄小龙, 吴文嫱, 黄东益, 夏薇. 参薯DaKNOX16基因的特征分析及互作蛋白的筛选验证 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(4): 557-565. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250006
[3]	王瑞玲, 郑攀艳, 李娜, 董莲, 黄家权, 邹智. 油莎豆CeWRI2互作蛋白的筛选与鉴定——以CeHB1为例 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(): 1-10. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20260017
[4]	郑雨, 程潇, 程科, 赵惠萍. 木薯RLK1候选互作蛋白筛选及其与BSK互作的酵母验证 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(2): 223-232. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240187
[5]	梁泳琪, 王雨天, 高保森, 赵瑞白, 王洪星, 李瑾, 曹先梅. 利用酵母双杂交筛选槟榔黄化相关病毒p26的宿主互作蛋白 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(1): 91-100. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250066
[6]	吴竞远, 唐璐芝, 朱彬彬, 赵惠萍. 木薯生长素响应因子MeARF的克隆及互作蛋白的筛选 . 热带生物学报（中英文）, 2025, 16(4): 495-503. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240148
[7]	熊越, 沈文涛, 庹德财, 黎小瑛, 言普, 周鹏. 番木瓜eIF4E家族蛋白的亚细胞定位 . 热带生物学报（中英文）, 2017, 8(4): 415-418. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.04.007
[8]	曾广琳, 张晶晶, 龚烨, 张伟敏, 潘永贵, 陈文学, 白新鹏. 番木瓜皮可溶性膳食纤维酸碱耦合法提取工艺的优化 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(4): 489-496,537. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.04.014
[9]	钟曼茜, 从心黎, 张史青, 黄绵佳. 外源壳聚糖涂膜处理番木瓜的常温保鲜效果 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(2): 220-223. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.014
[10]	郭子娟, 曾凤, 李雯. 外源乙烯对“橡皮化”番木瓜果实品质及软化的影响 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(2): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.013
[11]	何应对, 井涛, 王丽霞, 刘永霞, 丁哲利, 韩丽娜, 林竹, 王必尊. 番木瓜贮藏期果实品质及果皮色素的变化 . 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(3): 332-337. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.009
[12]	杨子平, 李辉亮, 郭冬, 彭世清. 巴西橡胶树胶乳酵母双杂交cDNA表达文库的构建及分析 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(4): 303-307. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.04.001
[13]	周骊, 李泽友, 沈文涛, 靳云奎, 周鹏. 番木瓜种子中异硫氰酸苄酯(BITC)的抑癌试验 . 热带生物学报（中英文）, 2012, 3(2): 130-134. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.02.006
[14]	张东东, 言普, 沈文涛, 黎小瑛, 周鹏. 番木瓜eIF4E突变基因的构建 . 热带生物学报（中英文）, 2012, 3(2): 126-129,134. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.02.014
[15]	陈瑶, 沈文涛, 言普, 黎小瑛, 周鹏. 番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 113-116. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.006
[16]	周鹏, 纪中华, 段日汤, 沈文涛, 黎小瑛. 3个番木瓜品种组培苗在云南元谋地区的种植试验 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(3): 193-196. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.03.014
[17]	熊月明. 番木瓜两性株株性转化时温度对叶片内4种物质含量的影响 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(3): 237-240. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.012
[18]	秦云霞, 戚继艳, 唐朝荣. 橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(4): 314-320. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015
[19]	周鹏, 沈文涛, 言普, 黎小瑛. 我国番木瓜产业发展的关键问题及对策 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(3): 257-260,264. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.020
[20]	李泽友, 沈文涛, 言普, 李亚丽, 周鹏. 番木瓜CYP79A2基因片段的克隆与序列分析 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 55-58. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.015

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番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

1. 海南大学农学院, 海南海口 570228;

2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部热带作物生物技术重点开放实验室, 海南海口 571101

基金项目:

国家自然科学基金项目(30760134)

中央级公益性科研院所基本科研业务费资助项目(ITBBZD0732)

作者简介:
吴金燕（1985－），女，湖南岳阳市人，海南大学农学院，生物化学与分子生物学专业2007级硕士生.

通讯作者: 周鹏（1963－），男，研究员／教授，博士生导师，E-mail：zhp6301@126.com Tel.0898－66988564.

收稿日期: 2009-09-09

中图分类号: S667.9；Q78

关键词:

酵母双杂交 /

自激活检测

摘要: 通过RT-PCR获得番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的编码区,将其分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-eIF4E,pBD-GAL4-eIFiso4E。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,获得了正确的番木瓜eIF4E,eIFiso4E基因编码区,并成功克隆到pBD-GAL4诱饵载体中,且转化有诱饵载体的YRG-2在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,在SD/-His-Trp营养缺陷平板上不能生长,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,这为下一步利用酵母双杂交系统检测番木瓜eIF4E,eIFiso4E蛋白与病毒的相互作用奠定了基础。

English Abstract

吴金燕, 言普, 沈文涛, 周鹏. 番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测[J]. 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

引用本文:

吴金燕, 言普, 沈文涛, 周鹏. 番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测[J]. 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

WU Jin-yan, YAN Pu, SHEN Wen-tao, ZHOU Peng. Construction and Autoactivation Identification of Bait Vector Containing Papaya eIF4E and eIFiso4E Gene in Yeast Two Hybrid System[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

Citation:

WU Jin-yan, YAN Pu, SHEN Wen-tao, ZHOU Peng. Construction and Autoactivation Identification of Bait Vector Containing Papaya eIF4E and eIFiso4E Gene in Yeast Two Hybrid System[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 50-54. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.014

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