橡胶树蔗糖转运蛋白基因<i>SOS</i>酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测

秦云霞; 戚继艳; 唐朝荣

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

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橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测

秦云霞, 戚继艳, 唐朝荣

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秦云霞, 戚继艳, 唐朝荣. 橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测[J]. 热带生物学报, 2010, 1(4): 314-320. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

引用本文:

秦云霞, 戚继艳, 唐朝荣. 橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测[J]. 热带生物学报, 2010, 1(4): 314-320. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

QIN Yun-xia, QI Ji-yan, TANG Chao-rong. Construction of Bait Vectors Containing Sucrose Transporter Genes of Hevea Brasiliensis in SOS Recruitment System and Identification of their Autonomous Activation Effects[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(4): 314-320. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

Citation:

QIN Yun-xia, QI Ji-yan, TANG Chao-rong. Construction of Bait Vectors Containing Sucrose Transporter Genes of Hevea Brasiliensis in SOS Recruitment System and Identification of their Autonomous Activation Effects[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(4): 314-320. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

中国热带农业科学院橡胶研究所

基金项目:

国家自然科学基金(30760114)

公益性行业(农业)科研专项(nyhyzx07-033-6)

农业部基本科研业务费(XJSYWFZX2008-16,XJSYWFZX2010-13)

详细信息

第一作者:
秦云霞（1971－），女，河南禹州人，中国热带农业科学院像胶研究所助理研究员.

通信作者:
唐朝荣，研究员.E-mail：chaorongtang@126.com

中图分类号: Q816

Construction of Bait Vectors Containing Sucrose Transporter Genes of Hevea Brasiliensis in SOS Recruitment System and Identification of their Autonomous Activation Effects

1. Rubber Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou 571737, China;

摘要: 为了筛选巴西橡胶树蔗糖转运蛋白(HbSUT)的互作蛋白质,构建了以SOS恢复系统为原理的胞质酵母双杂交系统的6个HbSUT基因的诱饵载体,并进行了自激活检测。通过PCR技术从携带HbSUT基因的质粒中获得预期的基因编码序列,将目标片段定向插入诱饵载体pSOS的SalⅠ及NotⅠ酶切位点之间,酶切和测序结果表明,获得了序列和读框正确的6个HbSUT基因的诱饵载体pSOS-SUTs,进一步导入酵母温度敏感酵母cdc25H菌株中,检测其表达产物对酵母SOS恢复系统Ras信号通路的激活作用,除pSOS-SUT5外,其他5个诱饵载体对酵母菌株均无激活作用,因而适合于进行后续互作蛋白质筛选研究。
- 巴西橡胶树 /
- 蔗糖转运蛋白 /
- 诱饵载体 /
- SOS恢复系统 /
- 酵母双杂交系统
Abstract: In order to screen the interacting proteins of sucrose transporters （SUTs） from Hevea brasiliensis,the bait vectors of the six sucrose transporters of cytoplasmic yeast two-hybrid system,which was based on Sos recruitment system （SRS）,were constructed and detected for their self activity. The coding sequences of SUTs were obtained by PCR from the plasmids containing respective Hevea SUTs,and the amplified products were cloned into the bait vector pSos at site Sal Ⅰ and Not Ⅰ. Restriction analysis and sequencing confirmed the sequence identity and the correct in frame fusion with the Sos gene of pSos. The resultant bait vectors of the 6 HbSUT genes were termed as pSos-SUTs. The pSos-SUTs were transformed into the temperature-sensitive strain cdc25H,and detected for their self activating effects. The results showed that except for pSos-SUT5,the other five bait vectors had no autonomous activation upon the yeast strain,which were suitable for the follow-up studies.
- Hevea brasiliensis /
- Sucrose transporter /
- bait vector /
- Sos recruitment system /
- yeast two-hybrid system

[1]	张倩玉, 袁红梅. 橡胶树HbCCoAOMT家族基因的鉴定 . 热带生物学报, 2024, 15(6): 728-736. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240093
[2]	刘云飞, 李言, 田维敏. 橡胶树蛋白激酶基因SnRK2.7的克隆及表达 . 热带生物学报, 2024, 15(1): 1-9. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230004
[3]	刘红东, 党一敏, 王英, 高和琼, 庄南生. 巴西橡胶树雄性不育相关候选基因HbXTH23的表达 . 热带生物学报, 2022, 13(6): 550-557. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2022.06.002
[4]	高豫, 庄南生, 王英, 高和琼. MYC基因家族5成员在巴西橡胶树染色体上的物理定位 . 热带生物学报, 2018, 9(2): 163-169. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.02.006
[5]	杨署光, 吴绍华, 陈月异, 李言, 张世鑫, 史敏晶, 田维敏. 巴西橡胶树HbGSK1的基因克隆与表达分析 . 热带生物学报, 2018, 9(3): 302-311. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.03.006
[6]	林贤桂, 翟金玲, 黄惜. 巴西橡胶树HbMYBs转录因子的克隆及表达分析 . 热带生物学报, 2018, 9(1): 12-20. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.01.002
[7]	郝慧, 曹玉鑫, 翟金玲, 黄惜. 巴西橡胶树HbNAC1转录因子互作顺式作用元件的筛选 . 热带生物学报, 2017, 8(2): 141-146. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.002
[8]	全彩虹, 李言, 田维敏. 巴西橡胶树HbICE2基因的克隆及表达分析 . 热带生物学报, 2017, 8(2): 133-140. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.001
[9]	彭宝丰, 王英, 高和琼, 庄南生. 橡胶素基因家族4个成员在橡胶树染色体上的定位 . 热带生物学报, 2016, 7(3): 318-324. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.007
[10]	唐冰霞, 王英, 高和琼, 庄南生. 巴西橡胶树热研7-33-97品种45S rDNA的FISH分析及定位 . 热带生物学报, 2015, 6(3): 246-249,268. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.004
[11]	方佳俊, 黎秀琼, 罗红丽. 巴西橡胶树铁螯合物还原酶基因(HbFRO)的克隆及表达 . 热带生物学报, 2015, 6(2): 105-112. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.02.001
[12]	应佳志, 毕政鸿, 陈涛, 华玉伟. 巴西橡胶树LEAFY基因的克隆及其对拟南芥的转化 . 热带生物学报, 2015, 6(3): 250-255. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.005
[13]	张霖, 刘进平. 巴西橡胶树死皮病相关基因与蛋白质研究进展 . 热带生物学报, 2015, 6(3): 347-352. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.03.021
[14]	徐静文, 廉文君, 曹玉鑫, 夏志辉, 黄惜. 巴西橡胶树树皮环氧树脂组织切片及染色技术 . 热带生物学报, 2014, 5(2): 162-165,161. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2014.02.014
[15]	刘长仁, 刘伟, 翟金玲, 訾亮, 黄惜. 拟南芥AtGRP7基因诱饵载体的构建及酵母双杂的初筛 . 热带生物学报, 2012, 3(2): 121-125. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.02.002
[16]	刘伟, 翟金玲, 许慧敏, 黄惜. 橡胶HbJAZ1基因的原核表达与纯化分析 . 热带生物学报, 2011, 2(2): 117-122. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.016
[17]	祁栋灵, 王秀全, 黄月球, 张志扬. 天然橡胶产业提升探析——我国橡胶树栽培及胶园管理存在问题及建议 . 热带生物学报, 2011, 2(1): 72-77. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.01.015
[18]	罗红丽, 闫志烨. 巴西橡胶树抗坏血酸过氧化酶基因HbAPX的克隆及其对水杨酸的应答 . 热带生物学报, 2011, 2(3): 197-203. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.03.018
[19]	吴瑞, 朱家红, 张全琪, 张治礼. 巴西橡胶树LIM结构域基因克隆与生物信息学分析 . 热带生物学报, 2010, 1(1): 62-66. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.019
[20]	徐晓梅, 史敏晶, 吴继林, 郝秉中, 田维敏. 橡胶树胶乳中橡胶粒子凝集相关蛋白研究进展 . 热带生物学报, 2010, 1(1): 90-94. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.020

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橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

中国热带农业科学院橡胶研究所

基金项目:

国家自然科学基金(30760114)

公益性行业(农业)科研专项(nyhyzx07-033-6)

农业部基本科研业务费(XJSYWFZX2008-16,XJSYWFZX2010-13)

作者简介:
秦云霞（1971－），女，河南禹州人，中国热带农业科学院像胶研究所助理研究员.

通讯作者: 唐朝荣，研究员.E-mail：chaorongtang@126.com

收稿日期: 2010-09-05

中图分类号: Q816

关键词:

SOS恢复系统 /

摘要: 为了筛选巴西橡胶树蔗糖转运蛋白(HbSUT)的互作蛋白质,构建了以SOS恢复系统为原理的胞质酵母双杂交系统的6个HbSUT基因的诱饵载体,并进行了自激活检测。通过PCR技术从携带HbSUT基因的质粒中获得预期的基因编码序列,将目标片段定向插入诱饵载体pSOS的SalⅠ及NotⅠ酶切位点之间,酶切和测序结果表明,获得了序列和读框正确的6个HbSUT基因的诱饵载体pSOS-SUTs,进一步导入酵母温度敏感酵母cdc25H菌株中,检测其表达产物对酵母SOS恢复系统Ras信号通路的激活作用,除pSOS-SUT5外,其他5个诱饵载体对酵母菌株均无激活作用,因而适合于进行后续互作蛋白质筛选研究。

English Abstract

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doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

第一作者: 秦云霞（1971－），女，河南禹州人，中国热带农业科学院像胶研究所助理研究员.

通信作者: 唐朝荣，研究员.E-mail：chaorongtang@126.com

Construction of Bait Vectors Containing Sucrose Transporter Genes of Hevea Brasiliensis in SOS Recruitment System and Identification of their Autonomous Activation Effects

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橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.015

中国热带农业科学院橡胶研究所

作者简介: 秦云霞（1971－），女，河南禹州人，中国热带农业科学院像胶研究所助理研究员.

通讯作者: 唐朝荣，研究员.E-mail：chaorongtang@126.com

English Abstract

Construction of Bait Vectors Containing Sucrose Transporter Genes of Hevea Brasiliensis in SOS Recruitment System and Identification of their Autonomous Activation Effects

1. Rubber Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou 571737, China;

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第一作者:
秦云霞（1971－），女，河南禹州人，中国热带农业科学院像胶研究所助理研究员.

通信作者:
唐朝荣，研究员.E-mail：chaorongtang@126.com

作者简介:
秦云霞（1971－），女，河南禹州人，中国热带农业科学院像胶研究所助理研究员.