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pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价

凌博,  陈丽青,  王宇,  杨诺,  范丽霞,  郭桂英,  李雪松,  曾纪锋,  李迁,  郑继平

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凌博, 陈丽青, 王宇, 杨诺, 范丽霞, 郭桂英, 李雪松, 曾纪锋, 李迁, 郑继平. pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价[J]. 热带生物学报, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
引用本文: 凌博, 陈丽青, 王宇, 杨诺, 范丽霞, 郭桂英, 李雪松, 曾纪锋, 李迁, 郑继平. pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价[J]. 热带生物学报, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
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LING Bo, CHEN Liqing, WANG Yu, YANG Nuo, FAN Lixia, GUO Guiying, LI Xuesong, CENG Jifeng, LI Qian, ZHENG Jiping. Construction of pSETsac B plasmid and evaluation of kdp E gene knockout efficiency with and without markers in Aeromonas dhakensis[J]. Journal of Tropical Biology, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
Citation: LING Bo, CHEN Liqing, WANG Yu, YANG Nuo, FAN Lixia, GUO Guiying, LI Xuesong, CENG Jifeng, LI Qian, ZHENG Jiping. Construction of pSETsac B plasmid and evaluation of kdp E gene knockout efficiency with and without markers in Aeromonas dhakensis[J]. Journal of Tropical Biology, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
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pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056

  • 1. 海南大学 动物科技学院, 海口 570228;

  • 2. 上海市农业科学院 生物技术研究所, 上海 201106;

  • 3. 海南大学生命科学学院, 海口 570228;

  • 4. 海南大学 理学院, 海口 570228;

  • 5. 海南大学 网络与技术中心, 海口 570228

基金项目: 

国家自然科学基金(32060788,32060131)

海南省自然科学基金(321MS007,821MS029,821RC1052,2019RC084)

详细信息
    第一作者:

    凌博(1997-),女,海南大学生命科学学院2020级硕士研究生。E-mail:895418919@qq.com

    通信作者:

    郭桂英(1973-),女,高级实验师,硕士。研究方向:微生物。E-mail:815827434@qq.com

  • 中图分类号: Q784

Construction of pSETsac B plasmid and evaluation of kdp E gene knockout efficiency with and without markers in Aeromonas dhakensis

  • 1. School of Animal Science and Technology, Hainan University, Haikou, Hainan 570228;

  • 2. Biotechnology Research Institute, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106;

  • 3. School of Life Sciences, Hainan University, Haikou, Hainan 570228;

  • 4. School of Science, Hainan University, Haikou, Hainan 570228;

  • 5. Network and Technology Center, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

  • 摘要: 为构建一种新型基因敲除质粒，以pSET4s和pK18mobsac B质粒为基础，通过PCR和酶切连接的方法，构建了新质粒pSETsac B，然后以pK18mobsac B质粒为对照，评价新建质粒对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕敲除（带有四环素筛选标记）和无痕敲除效率。结果表明，两种质粒在有痕敲除效率上无差别，但在无痕敲除上，pSETsac B的敲除效率显著高于对照质粒pK18mobsac B。由于p SETsac B为穿梭性温敏质粒，因此，该质粒可望在革兰氏阳性和阴性菌的遗传机制研究中皆可发挥作用，本研究同时也为检视kdp E基因在达卡气单胞菌中的功能提供了前期的突变体材料。
    Abstract: In order to construct a novel gene-knockout plasmid, a novel plasmid pSETsac B was constructed based on the plasmids pSET4s and pK18mobsac B by using PCR and cloning techniques. Then pK18mobsac B was used as control, the knockout efficiency of kdp E gene in Aeromonas dhakensis was evaluated via the newly constructed plasmid with or without tetr marker. The results showed that there was no difference in the knockout efficiency between the two plasmids with tetr marker, but the efficiency of scarless deletion by pSETsac B was significantly higher than that of the control plasmid pK18mobsac B. p SETsac B is a thermosensitive shuttle plasmid, and is hence expected to play a role in the genetic mechanism of Gram-positive and Gram-negative bacteria. This study also provides important mutant material for investigating the kdp E gene of A. dhakensis.
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    出版历程
    • 收稿日期:  2023-04-26
    • 修回日期:  2023-09-20
    • 刊出日期:  2024-07-25

    pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价

    doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
    • 1. 海南大学 动物科技学院, 海口 570228;
    • 2. 上海市农业科学院 生物技术研究所, 上海 201106;
    • 3. 海南大学生命科学学院, 海口 570228;
    • 4. 海南大学 理学院, 海口 570228;
    • 5. 海南大学 网络与技术中心, 海口 570228
      • 基金项目:

      国家自然科学基金(32060788,32060131)

      海南省自然科学基金(321MS007,821MS029,821RC1052,2019RC084)

      作者简介:

      凌博(1997-),女,海南大学生命科学学院2020级硕士研究生。E-mail:895418919@qq.com

      通讯作者: 郭桂英(1973-),女,高级实验师,硕士。研究方向:微生物。E-mail:815827434@qq.com
    • 收稿日期: 2023-04-26
    • 修回日期: 2023-09-20
    • 刊出日期: 2024-07-25

    • 中图分类号: Q784

    摘要: 为构建一种新型基因敲除质粒，以pSET4s和pK18mobsac B质粒为基础，通过PCR和酶切连接的方法，构建了新质粒pSETsac B，然后以pK18mobsac B质粒为对照，评价新建质粒对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕敲除（带有四环素筛选标记）和无痕敲除效率。结果表明，两种质粒在有痕敲除效率上无差别，但在无痕敲除上，pSETsac B的敲除效率显著高于对照质粒pK18mobsac B。由于p SETsac B为穿梭性温敏质粒，因此，该质粒可望在革兰氏阳性和阴性菌的遗传机制研究中皆可发挥作用，本研究同时也为检视kdp E基因在达卡气单胞菌中的功能提供了前期的突变体材料。

    English Abstract

    凌博, 陈丽青, 王宇, 杨诺, 范丽霞, 郭桂英, 李雪松, 曾纪锋, 李迁, 郑继平. pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价[J]. 热带生物学报, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
    引用本文: 凌博, 陈丽青, 王宇, 杨诺, 范丽霞, 郭桂英, 李雪松, 曾纪锋, 李迁, 郑继平. pSETsac B质粒构建及其对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕与无痕敲除效率评价[J]. 热带生物学报, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
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    LING Bo, CHEN Liqing, WANG Yu, YANG Nuo, FAN Lixia, GUO Guiying, LI Xuesong, CENG Jifeng, LI Qian, ZHENG Jiping. Construction of pSETsac B plasmid and evaluation of kdp E gene knockout efficiency with and without markers in Aeromonas dhakensis[J]. Journal of Tropical Biology, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
    Citation: LING Bo, CHEN Liqing, WANG Yu, YANG Nuo, FAN Lixia, GUO Guiying, LI Xuesong, CENG Jifeng, LI Qian, ZHENG Jiping. Construction of pSETsac B plasmid and evaluation of kdp E gene knockout efficiency with and without markers in Aeromonas dhakensis[J]. Journal of Tropical Biology, 2024, 15(4): 452-459. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230056
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