女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化

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女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化

李传代, 陈飞, 王天地, 刘国民

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李传代, 陈飞, 王天地, 刘国民. 女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 热带生物学报, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

引用本文:

李传代, 陈飞, 王天地, 刘国民. 女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 热带生物学报, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

LI Chuan-dai, CHEN Fei, WANG Tian-di, LIU Guo-min. Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Ligustrum lucidum Ait.[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

Citation:

LI Chuan-dai, CHEN Fei, WANG Tian-di, LIU Guo-min. Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Ligustrum lucidum Ait.[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

李传代^1,2,
陈飞^1,2,
王天地^1,2,
刘国民^1,2, ,

1. 海南大学热带生物资源教育部重点实验室, 海南, 海口 570228;
2. 海南大学苦丁茶研究所, 海南, 海口 570228

基金项目:

国家自然科学基金资助项目(39860048)

第一作者:
李传代(1980-)，男，海南海口人，海南大学农学院2007级作物遗传育种专业硕士研究生.

通信作者:
刘国民(1955-)，男，湖南祁东人，教授，博士，博士生导师.E-mail:kudingcha_nol@yahoo.com.cn

中图分类号: Q789

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Ligustrum lucidum Ait.

LI Chuan-dai^1,2,
CHEN Fei^1,2,
WANG Tian-di^1,2,
LIU Guo-min^{1,2
, ,}

1. Key Laboratory of Tropical Biological Resources, MOE, Hainan University, Haikou 570228, China;
2. Kudingcha Research Institute of Hainan University, Haikou 570228, China

摘要: 利用单因子试验,测试了女贞ISSR-PCR反应体系中的主要影响因子。经过优化实验,建立了一套适合于女贞的稳定的ISSR-PCR反应体系:10×buffer2.5μL,2.0mmol·L^-1的MgCl₂,200μmol·L^-1的dNTPs,1.5U的Taq酶,0.4的μmol·L^-1的引物,10ng的DNA模板。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,52～62℃退火45s,72℃延伸120s,进行35个循环,72℃延伸8min,4℃保存。应用该优化的ISSR-PCR实验体系对12份女贞种质材料进行了扩增,均能扩增出丰富稳定的条带。
- 女贞 /
- ISSR /
- 影响因子 /
- 体系优化
Abstract: Single factor experiment was used to test the effect factors of ISSR-PCR reaction system.After the optimization,a suitable ISSR-PCR reaction system of Ligustrum lucidum Ait.was established as follows:10 × buffer 2.5 μL,2.0 mmol·L^-1 MgCl₂,200 μmol·L^-1 dNTPs,1.5 U Taq polymerase,0.4 μmol·L^-1 primers,10 ng DNA template,which were contained in 25 μL reaction solution.The optimized amplification program was that predenaturing at 94 ℃ for 4 min,denaturing at 94 ℃ for 40 s,annealing at 52 ℃—60 ℃ for 45 s,extension at 72 ℃ for 120 s,for 35 cycles,extension at 72 ℃ for 8 min at last.The products were stored at 4 ℃.The optimized ISSR-PCR experiment system was applied in the amplification of 12 varieties of germplasm materials of Ligustrum lucidum Ait and the results indicated that the rich and stable bands can be amplified.
- Ligustrum lucidum Ait. /
- ISSR /
- influential factors /
- optimization

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女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

1. 海南大学热带生物资源教育部重点实验室, 海南, 海口 570228;

2. 海南大学苦丁茶研究所, 海南, 海口 570228

基金项目:

国家自然科学基金资助项目(39860048)

作者简介:
李传代(1980-)，男，海南海口人，海南大学农学院2007级作物遗传育种专业硕士研究生.

通讯作者: 刘国民(1955-)，男，湖南祁东人，教授，博士，博士生导师.E-mail:kudingcha_nol@yahoo.com.cn

收稿日期: 2010-03-29

中图分类号: Q789

关键词:

摘要: 利用单因子试验,测试了女贞ISSR-PCR反应体系中的主要影响因子。经过优化实验,建立了一套适合于女贞的稳定的ISSR-PCR反应体系:10×buffer2.5μL,2.0mmol·L^-1的MgCl₂,200μmol·L^-1的dNTPs,1.5U的Taq酶,0.4的μmol·L^-1的引物,10ng的DNA模板。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,52～62℃退火45s,72℃延伸120s,进行35个循环,72℃延伸8min,4℃保存。应用该优化的ISSR-PCR实验体系对12份女贞种质材料进行了扩增,均能扩增出丰富稳定的条带。

English Abstract

李传代, 陈飞, 王天地, 刘国民. 女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 热带生物学报, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

引用本文:

李传代, 陈飞, 王天地, 刘国民. 女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 热带生物学报, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

LI Chuan-dai, CHEN Fei, WANG Tian-di, LIU Guo-min. Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Ligustrum lucidum Ait.[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

Citation:

LI Chuan-dai, CHEN Fei, WANG Tian-di, LIU Guo-min. Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Ligustrum lucidum Ait.[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

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