胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

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胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

邱丰艳, 邓用川, 林栖凤, 刘国民

文章导航 > 热带生物学报 > 2010 > 1(4): 301-306,313

邱丰艳, 邓用川, 林栖凤, 刘国民. 胡萝卜ISSR反应体系优化的研究[J]. 热带生物学报, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

引用本文:

邱丰艳, 邓用川, 林栖凤, 刘国民. 胡萝卜ISSR反应体系优化的研究[J]. 热带生物学报, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

QIU Fengy-an, DENG Yong-chuan, LIN Qi-feng, LIU Guo-min. Study on Optimization of ISSR Reaction System for Carrot[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

Citation:

QIU Fengy-an, DENG Yong-chuan, LIN Qi-feng, LIU Guo-min. Study on Optimization of ISSR Reaction System for Carrot[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

1. 海南大学苦丁茶研究所, 海南海口 570228;
2. 海南大学生命科学与技术研究所, 海南海口 570228

基金项目:

海南省耐盐作物生物技术重点实验室开放基金资助项目(shkfjj0515)

第一作者:
邱丰艳（1979－），女，福建龙岩人，海南大学农学院2005级作物遗传育种学专业硕士研究生，现在福建龙岩学院工作.

通信作者:
刘国民（1955－），男，湖南祁东人，教授，博士，博士生导师.E-mail：13005082258@163.com

中图分类号: Q789

Study on Optimization of ISSR Reaction System for Carrot

1. Institute of Kudingcha, Hainan University, Haikou 570228, China;
2. Institute of Biology Science and Technology, Hainan University, Haikou 570228, China

摘要: 以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer2.5μL,2.0mmol·L^-1Mg²⁺,200μmol·L^-1dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.5μmol·L^-1,DNA模板20ng。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,48～58℃退火45s,72℃延伸2min,进行35个循环,72℃延伸8min,在16℃保存。应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物。
- 胡萝卜 /
- ISSR /
- 优化
Abstract: The improved CTAB method was used to extract genomic DNA of Daucus carota L. var. sativa.,which were used as the template for ISSR-PCR. A optimal ISSR-PCR reaction system suitable to Daucus carota L. var. sativa DC. was established via single factor experiments. The optimal ISSR-PCR system was that 25 μL reaction solution contained 2.5 μL 10×PCR buffer,2.5—3.0 mmol·L^-1 Mg²⁺,200μmol·L^-1 dNTPs,1.5U Taq polymerase,0.5 μmol·L^-1 primers,20ng DNA template.The optimized amplification program was that pre-denaturing at 94 ℃ for 4min,then denaturing at 94 ℃ for 40 s,primer annealing at 48 ℃—58 ℃ for 45 s,extension at 72 ℃ for 2 min,for 35 cycles,extension at 72 ℃ for 8min. The products were stored at 16 ℃. 24 effective primers were screened out.
- Daucus carota L. var. sativa DC. /
- ISSR /
- optimization

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[2]	刘亚欣, 王宇, 杨诺, 郭桂英, 李迁, 曾纪锋, 郑继平. 乳酸乳球菌电击转化方法的优化 . 热带生物学报, 2020, 11(2): 245-250. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.016
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[20]	李传代, 陈飞, 王天地, 刘国民. 女贞ISSR-PCR反应体系的建立与优化 . 热带生物学报, 2010, 1(2): 99-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.02.012

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胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

1. 海南大学苦丁茶研究所, 海南海口 570228;

2. 海南大学生命科学与技术研究所, 海南海口 570228

基金项目:

海南省耐盐作物生物技术重点实验室开放基金资助项目(shkfjj0515)

作者简介:
邱丰艳（1979－），女，福建龙岩人，海南大学农学院2005级作物遗传育种学专业硕士研究生，现在福建龙岩学院工作.

通讯作者: 刘国民（1955－），男，湖南祁东人，教授，博士，博士生导师.E-mail：13005082258@163.com

收稿日期: 2010-06-15

中图分类号: Q789

关键词:

摘要: 以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer2.5μL,2.0mmol·L^-1Mg²⁺,200μmol·L^-1dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.5μmol·L^-1,DNA模板20ng。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,48～58℃退火45s,72℃延伸2min,进行35个循环,72℃延伸8min,在16℃保存。应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物。

English Abstract

邱丰艳, 邓用川, 林栖凤, 刘国民. 胡萝卜ISSR反应体系优化的研究[J]. 热带生物学报, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

引用本文:

邱丰艳, 邓用川, 林栖凤, 刘国民. 胡萝卜ISSR反应体系优化的研究[J]. 热带生物学报, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

QIU Fengy-an, DENG Yong-chuan, LIN Qi-feng, LIU Guo-min. Study on Optimization of ISSR Reaction System for Carrot[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

Citation:

QIU Fengy-an, DENG Yong-chuan, LIN Qi-feng, LIU Guo-min. Study on Optimization of ISSR Reaction System for Carrot[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(4): 301-306,313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.04.009

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