对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

李红梅; 江晓; 任春华; 赵哲; 胡超群

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

李红梅, 江晓, 任春华, 赵哲, 胡超群

文章导航 > 热带生物学报 > 2016 > 7(3): 307-313

李红梅, 江晓, 任春华, 赵哲, 胡超群. 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用[J]. 热带生物学报, 2016, 7(3): 307-313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

引用本文:

LI Hongmei, JIANG Xiao, REN Chunhua, ZHAO Zhe, HU Chaoqun. Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(3): 307-313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

Citation:

LI Hongmei, JIANG Xiao, REN Chunhua, ZHAO Zhe, HU Chaoqun. Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(3): 307-313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

李红梅^1,2,
江晓¹,
任春华¹,
赵哲¹,
胡超群^1, ,

中国科学院南海海洋研究所/热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301;
2. 中国科学院大学, 北京 100049

基金项目:

广东省省级科技计划项目(2014B030301064)

“海洋微生物功能物质及其开发利用的研究”项目资助(KSCX2-EW-G-12B)

广东省海洋经济创新发展区域示范专项项目(GD2012-B03-003)

详细信息

第一作者:
李红梅(1986-),女,中国科学院大学2016级博士研究生,主要从事病原快速检测研发.E-mail:hongmeili22@126.com

通信作者:
胡超群(1962-),男,研究员,主要从事海洋水产养殖、病害控制及生物技术研究.E-mail:hucq@sc-sio.ac.cn

中图分类号: Q786S917.4

Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay

1. Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology/Key Laboratory of Applied Marine Biology of Guangdong Province, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301, PR China;
2. University of Chinese Academy of Science, Beijing 100049

摘要: 笔者研究构建了一种基于ESE-Quant tube scanner设备的新型实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)IHHNV检测方法,评价其敏感性、特异性、反应速度和实际检测结果。结果表明,IHHNV实时LAMP检测方法在63℃条件下,30 min内检测到106稀释的基因组DNA,可检测到24个质粒拷贝;与27种包括多种水生动物以及对虾常见病原DNA均无交叉反应。通过对152份实际样品的检测,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为59.87%,与real-time PCR方法相当,高于其他检测方法。本研究建立的IHHNV实时LAMP检测方法对现场诊断具有较大的应用潜力。
- 传染性皮下及造血组织坏死病毒 /
- 实时荧光LAMP /
- ESE-Quant tube scanner
Abstract: Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus（ IHHNV） causes large economic losses to the shrimp aquaculture industry in the world. It is necessary to develop a fast,easy and accurate method to detect IHHNV. In this study,we developed a real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification assay for IHHNV detection on a small ESE-Quant Tube Scanner device and evaluated its sensitivity,specificity and rapidity. This method had a detection limit of 106 dilution template of genomic DNA within 30 min under isothermal condition at 63 C,and 24 copies of plasmid were detected. Furthermore,the approach had no non-specific signal response to other DNAs,including those of 27 species of aquatic animals and penaeid shrimp pathogens. This method had a positive detection rate of 59. 87%,similar to that of the real-time PCR but higher than other detection methods,and hence has great application potential in on-the-spot detection of IHHNV in shrimps.
- Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus /
- real-time loop-mediated isothermal amplification assay /
- ESE-Quant tube scanner

[1]	黄玉媛, 叶倩倩, 陈庆河, 梁启福. PcSec62参与调控辣椒疫霉生长发育及致病性 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-10. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240170
[2]	符春婵, 胡旭, 林佳奇, 马梦欣, 王晓椿, 王志勇, 廖丽. 海雀稗低氮耐受性指标筛选及综合评价 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-9. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240191
[3]	缪蝶, 张舒心, 王鹏. 番茄不同组织及不同激素处理下内参基因的筛选 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-13. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240140
[4]	张龙婷, 郑智, 王尧, 高煜杰. 鞍带石斑鱼MRFs基因cDNA克隆及组织表达分析 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250030
[5]	申逸, 郭天赐, 来卓元, 易博, 林川, 朱贺然, 万逸, 毛海梅, 曲龙. 基于荧光光电技术的大肠杆菌药敏分析 . 热带生物学报, 2025, 16(): 1-8. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240149
[6]	邓树庆, 蔡杏伟, 王韩, 符成慧, 张清凤, 申志新, 李高俊, 李芳远. 保亭近腹吸鳅遗传多样性及保护建议 . 热带生物学报, 2024, 15(4): 419-426. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230112
[7]	张仲, 邹游兴, 但建国. 施氮水平对普通大蓟马繁殖及子代性比的影响 . 热带生物学报, 2024, 15(1): 79-84. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230061
[8]	冯亚亭, 张逸杰, 林南方, 陈银华, 骆凯. 木薯不同组织内生细菌多样性的比较分析 . 热带生物学报, 2024, 15(2): 141-149. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230077
[9]	谢言, 邢薿文, 肖倩, 覃尧. 装载鸡传染性支气管炎病毒 S1蛋白重组HD11细胞源外体的构建 . 热带生物学报, 2022, 13(6): 562-568. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2022.06.004
[10]	贺延恒, 车海彦, 曹学仁. 橡胶树丛枝病的组织结构观察及分子发生机理 . 热带生物学报, 2020, 11(2): 223-230. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.013
[11]	杨亚飞, 刘沈徽, 黄东益, 吴文嫱. 适于荧光原位杂交的大薯叶片染色体制片技术 . 热带生物学报, 2020, 11(1): 100-104. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.015
[12]	张转丹, 肖正泮, 武新丽, 孙艳, 罗应, 吴昊, 韦双双, 裴业春, 王大勇. 鱼类神经坏死病毒衣壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN1融合基因的原核表达 . 热带生物学报, 2020, 11(2): 145-155. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.004
[13]	赵克学, 许淑娟, 马瑞仙, 耿金静, 刘杨, 李琼毅, 冯若飞. TRIM21基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 . 热带生物学报, 2020, 11(1): 111-117. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.01.017
[14]	卓文, 陈新, 刘秋妤, 唐敏. 铜离子胁迫对近江牡蛎软体组织及贝壳重金属含量的影响 . 热带生物学报, 2019, 10(1): 1-5. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.01.001
[15]	刘益巧, 孙志华, 钱江, 长孙东亭, 罗素兰. CHRNA7基因荧光定量PCR检测方法的建立 . 热带生物学报, 2019, 10(2): 178-183. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.013
[16]	黄超, 张丽丽, 邓柳红, 张春发. 海南五指山美洲商陆抗病毒蛋白PAP-Ⅰ基因的原核表达及活性验证 . 热带生物学报, 2016, 7(1): 82-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.014
[17]	刘培培, 车海彦, 曹学仁, 杨毅, 罗大全. 侵染胡椒的黄瓜花叶病毒海南分离物全序列分析及亚组鉴定 . 热带生物学报, 2016, 7(2): 265-269. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.02.021
[18]	王刚, 孙成波, 蔡传彬, 曹佩星. 哈维氏弧菌和白斑综合症病毒对墨吉明对虾仔虾的致病性 . 热带生物学报, 2016, 7(1): 1-9. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.001
[19]	. 热带植物多样性保育及利用研究团队简介 . 热带生物学报, 2015, 6(2): 229-229.
[20]	向赟, 王刚, 陈兆明, 张锐, 孙成波. 不同温度条件下鳗弧菌和白斑综合症病毒对凡纳滨对虾的致病性 . 热带生物学报, 2015, 6(1): 11-17. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.01.002

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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

中国科学院南海海洋研究所/热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301;

2. 中国科学院大学, 北京 100049

基金项目:

广东省省级科技计划项目(2014B030301064)

“海洋微生物功能物质及其开发利用的研究”项目资助(KSCX2-EW-G-12B)

广东省海洋经济创新发展区域示范专项项目(GD2012-B03-003)

作者简介:
李红梅(1986-),女,中国科学院大学2016级博士研究生,主要从事病原快速检测研发.E-mail:hongmeili22@126.com

通讯作者: 胡超群(1962-),男,研究员,主要从事海洋水产养殖、病害控制及生物技术研究.E-mail:hucq@sc-sio.ac.cn

收稿日期: 2016-05-20

中图分类号: Q786S917.4

关键词:

传染性皮下及造血组织坏死病毒 /

实时荧光LAMP /

ESE-Quant tube scanner

摘要: 笔者研究构建了一种基于ESE-Quant tube scanner设备的新型实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)IHHNV检测方法,评价其敏感性、特异性、反应速度和实际检测结果。结果表明,IHHNV实时LAMP检测方法在63℃条件下,30 min内检测到106稀释的基因组DNA,可检测到24个质粒拷贝;与27种包括多种水生动物以及对虾常见病原DNA均无交叉反应。通过对152份实际样品的检测,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为59.87%,与real-time PCR方法相当,高于其他检测方法。本研究建立的IHHNV实时LAMP检测方法对现场诊断具有较大的应用潜力。

English Abstract

Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay

1. Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology/Key Laboratory of Applied Marine Biology of Guangdong Province, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301, PR China;

2. University of Chinese Academy of Science, Beijing 100049

Received Date: 2016-05-20

Keywords:

Abstract: Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus（ IHHNV） causes large economic losses to the shrimp aquaculture industry in the world. It is necessary to develop a fast,easy and accurate method to detect IHHNV. In this study,we developed a real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification assay for IHHNV detection on a small ESE-Quant Tube Scanner device and evaluated its sensitivity,specificity and rapidity. This method had a detection limit of 106 dilution template of genomic DNA within 30 min under isothermal condition at 63 C,and 24 copies of plasmid were detected. Furthermore,the approach had no non-specific signal response to other DNAs,including those of 27 species of aquatic animals and penaeid shrimp pathogens. This method had a positive detection rate of 59. 87%,similar to that of the real-time PCR but higher than other detection methods,and hence has great application potential in on-the-spot detection of IHHNV in shrimps.

引用本文:

Citation:

LI Hongmei, JIANG Xiao, REN Chunhua, ZHAO Zhe, HU Chaoqun. Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(3): 307-313. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

第一作者: 李红梅(1986-),女,中国科学院大学2016级博士研究生,主要从事病原快速检测研发.E-mail:hongmeili22@126.com

通信作者: 胡超群(1962-),男,研究员,主要从事海洋水产养殖、病害控制及生物技术研究.E-mail:hucq@sc-sio.ac.cn

Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay

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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.005

中国科学院南海海洋研究所/热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301; 2. 中国科学院大学, 北京 100049

作者简介: 李红梅(1986-),女,中国科学院大学2016级博士研究生,主要从事病原快速检测研发.E-mail:hongmeili22@126.com

通讯作者: 胡超群(1962-),男,研究员,主要从事海洋水产养殖、病害控制及生物技术研究.E-mail:hucq@sc-sio.ac.cn

English Abstract

Rapid Detection of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus（IHHNV） by Real-time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification Assay

1. Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology/Key Laboratory of Applied Marine Biology of Guangdong Province, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301, PR China; 2. University of Chinese Academy of Science, Beijing 100049

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第一作者:
李红梅(1986-),女,中国科学院大学2016级博士研究生,主要从事病原快速检测研发.E-mail:hongmeili22@126.com

通信作者:
胡超群(1962-),男,研究员,主要从事海洋水产养殖、病害控制及生物技术研究.E-mail:hucq@sc-sio.ac.cn

中国科学院南海海洋研究所/热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301;

2. 中国科学院大学, 北京 100049

作者简介:
李红梅(1986-),女,中国科学院大学2016级博士研究生,主要从事病原快速检测研发.E-mail:hongmeili22@126.com

1. Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology/Key Laboratory of Applied Marine Biology of Guangdong Province, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301, PR China;

2. University of Chinese Academy of Science, Beijing 100049