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产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

操凤, 刘雪冰, 曹献英

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操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

引用本文:

操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

Citation:

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

1. 海南大学材料与化工学院, 海口 570228;
2. 海南大学食品学院, 海口 570228

基金项目:

海南省研究生创新科研课题(S17)

海南省教育厅项目(CXY20140012)

第一作者:
操凤(1986-),女,海南大学材料与化工学院2011级硕士研究生.E-mail:study_cf1986@163.com

通信作者:
曹献英(1962-),女,研究员,博士生导师.研究方向:食品安全评价及天然活性物质抗肿瘤的研究.E-mail:cxying_02@163.com

中图分类号: Q93

Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes

1. College of Materials and Chemical Engineering, Hainan University, Haikou 570228;
2. College of Food Science and Technology, Hainan University, Haikou 570228, China

摘要: 提取精氨酸脱亚胺酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀法初步分离精氨酸脱亚胺酶,然后通过DEAESephadex A 50柱色谱层析和Sephadex G-100柱色谱层析进一步分离纯化精氨酸脱亚胺酶,并利用SDS-PAGE电泳法来鉴定其纯度,最终达到纯化产碱假单胞菌来源的精氨酸脱亚胺酶（ADI）的目的。结果表明:分离纯化过程中,粗酶液的总酶活为424.43 U,比酶活为0.42 U·mg^-1;盐析透析酶液的总酶活是222.10 U,比酶活为2.05 U·mg^-1;离子交换分析活性部位的总酶活为105.83 U,比酶活是5.61 U·mg^-1;凝胶渗透分析活性部位的总酶活为17.94 U,比酶活为11.80 U·mg^-1。纯化得到了电泳纯级别的ADI,其相对纯度为96%。因此,本研究方法可以得到较高纯度和酶活的精氨酸脱亚胺酶。
- 精氨酸脱亚胺酶 /
- 分离纯化 /
- 硫酸铵分级沉淀法 /
- 柱色谱层析
Abstract: Crude arginine deiminase（ ADI） enzyme was extracted from Pseudomonas alcaligenes,purified by using ammonium sulfate graded precipitation,and then further separated and purified by using DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-100 column chromatography to produce purified ADI. The purity of the purified ADI was determined by SDS-PAGE electrophoresis. The total enzyme activity of the ADI crude enzyme was detected to be 424. 43 U with a specific enzyme activity of 0. 42 U; the enzyme purified via salting out and dialysis had a total activity of 222. 10 U with a specific enzyme activity of 2. 05 U·mg^-1; the enzyme purified by ion exchange analysis showed a total activity of 105. 83 U at the active site and its specific enzyme activity was 5. 61 U·mg^-1; the enzyme purified through gel permeation chromatography had a total activity of 17. 94 U at the active site and its specific enzyme activity was 11. 80 U·mg^-1. The purified ADI had a relative purity of 96%,which can be used for electrophoresis. It is concluded that this method can be used to produce ADI with higher purity and activity.
- arginine deiminase /
- purification /
- ammonium sulfate graded precipitation /
- column chromatography

[1]	杨胜基, 刘伟莉, 林婧, 邓博, 苏振业, 孟丽华, 罗敦, 黄汉林. 桉树油桐尺蠖致病细菌的初步分离与鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(6): 989-996. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250072
[2]	郑伊蒙, 段家文, 张艺, 李晨辉, 谢珍玉, 黄爱优. 三角褐指藻乳酸脱氢酶的原核表达及纯化鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(1): 136-143. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240176
[3]	刘梓权, 朱家红, 王颖, 李辉亮, 李玉姬, 唐燕琼, 郭冬. 橡胶树HbbZIP74基因的表达分析及蛋白原核表达纯化 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(3): 399-409. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250015
[4]	韦丽菲, 陈舒畅, 蓝梦玲, 阳琪芝, 梁宏业, 覃祯俊. 珊瑚共生虫黄藻Cladocopium C1 sp.的分离培养和纯化 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(): 1-9. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250065
[5]	马超越, 彭世清, 郭冬, 朱家红, 王颖. 植物原生质体分离及其瞬时转化的应用 . 热带生物学报（中英文）, 2024, 15(2): 241-250. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230026
[6]	商瑞, 毛佳, 王延谦, 白亭亭, 杨春勇, 王红卫, 王艳芳, 郭睿, 李戈. 肾茶叶枯病病原的分离与鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2023, 14(2): 229-233. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2023.02.013
[7]	张伊动, 马香, 李宏, 唐鸿倩, 刘柱, 唐燕琼. 维氏气单胞菌Cbl蛋白的原核表达及纯化 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(3): 333-339. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.03.009
[8]	王猛, 王周雯, 丁一, 徐敏, 郭攀阳, 刘成立, 李佳雪, 李涛, 韦双双, 汤华. 根癌农杆菌介导的新暗色柱节孢菌遗传转化 . 热带生物学报（中英文）, 2021, 12(4): 412-418. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.04.002
[9]	张腾云, 徐文, 张鸣姗, 赵洪伟. 超高效液相色谱-串联质谱法检测东寨港海水中磺胺类药物残留 . 热带生物学报（中英文）, 2019, 10(2): 197-203. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.016
[10]	武新丽, 韦双双, 裴业春, 赵景锋, 王大勇. 反相高效液相色谱法对小鼠血清中基因重组人促肾上腺皮质激素前体及其代谢物的测定 . 热带生物学报（中英文）, 2019, 10(1): 83-88. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.01.014
[11]	张胜楠, 吴莹, 孙云, 曹贞洁, 周永灿. 卵形鲳鲹IgM蛋白的纯化和抗血清的制备 . 热带生物学报（中英文）, 2018, 9(4): 370-376. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.002
[12]	李秀竹, 陈婷婷, 刘佳怡, 宋海超, 史学群. 肉桂精油主要活性成分对芒果胶孢炭疽菌的抑制 . 热带生物学报（中英文）, 2018, 9(1): 81-89. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.01.011
[13]	操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件优化 . 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(1): 53-58,64. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.01.008
[14]	郭桂英, 李祥, 黎丹, 廖承红, 杨诺, 曾纪峰, 郑继平, 张立领, 余集楠. 蟒蛇肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(4): 332-334,346. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.04.017
[15]	李宏杨, 刘飞, 张凤琴, 李小龙, 刘国民. 超临界CO₂萃取技术分离和纯化苦丁茶中熊果酸的工艺 . 热带生物学报（中英文）, 2012, 3(3): 258-260,270. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.03.005
[16]	刘国民, 李娟玲, 周经阳. 野生喜热灵芝菌种分离技术研究 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(3): 209-213. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.03.011
[17]	武媛丽, 杨本鹏, 蔡文伟, 张树珍. 利用高效液相色谱法测定转基因甘蔗中的低聚果糖 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 101-106. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.008
[18]	刘伟, 翟金玲, 许慧敏, 黄惜. 橡胶HbJAZ1基因的原核表达与纯化分析 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 117-122. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.016
[19]	张英霞, 韦双双, 陆露, 陈聪伟, 迟婷婷, 安天琛, 关怀, 满初日嘎. 黄鳝皮肤白蛋白的纯化及性质 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(3): 226-229. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.03.022
[20]	刘运权, 张翠焕, 闻真珍, 黎扬辉, 刘伟. 金钗石斛类原球茎原生质体的分离 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

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产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

1. 海南大学材料与化工学院, 海口 570228;

2. 海南大学食品学院, 海口 570228

基金项目:

海南省研究生创新科研课题(S17)

海南省教育厅项目(CXY20140012)

作者简介:
操凤(1986-),女,海南大学材料与化工学院2011级硕士研究生.E-mail:study_cf1986@163.com

通讯作者: 曹献英(1962-),女,研究员,博士生导师.研究方向:食品安全评价及天然活性物质抗肿瘤的研究.E-mail:cxying_02@163.com

收稿日期: 2015-06-19

中图分类号: Q93

关键词:

精氨酸脱亚胺酶 /

硫酸铵分级沉淀法 /

柱色谱层析

摘要: 提取精氨酸脱亚胺酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀法初步分离精氨酸脱亚胺酶,然后通过DEAESephadex A 50柱色谱层析和Sephadex G-100柱色谱层析进一步分离纯化精氨酸脱亚胺酶,并利用SDS-PAGE电泳法来鉴定其纯度,最终达到纯化产碱假单胞菌来源的精氨酸脱亚胺酶（ADI）的目的。结果表明:分离纯化过程中,粗酶液的总酶活为424.43 U,比酶活为0.42 U·mg^-1;盐析透析酶液的总酶活是222.10 U,比酶活为2.05 U·mg^-1;离子交换分析活性部位的总酶活为105.83 U,比酶活是5.61 U·mg^-1;凝胶渗透分析活性部位的总酶活为17.94 U,比酶活为11.80 U·mg^-1。纯化得到了电泳纯级别的ADI,其相对纯度为96%。因此,本研究方法可以得到较高纯度和酶活的精氨酸脱亚胺酶。

English Abstract

操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

引用本文:

操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

Citation:

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

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