产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

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产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

操凤, 刘雪冰, 曹献英

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操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

引用本文:

操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

Citation:

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

1. 海南大学材料与化工学院, 海口 570228;
2. 海南大学食品学院, 海口 570228

基金项目:

海南省研究生创新科研课题(S17)

海南省教育厅项目(CXY20140012)

第一作者:
操凤(1986-),女,海南大学材料与化工学院2011级硕士研究生.E-mail:study_cf1986@163.com

通信作者:
曹献英(1962-),女,研究员,博士生导师.研究方向:食品安全评价及天然活性物质抗肿瘤的研究.E-mail:cxying_02@163.com

中图分类号: Q93

Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes

1. College of Materials and Chemical Engineering, Hainan University, Haikou 570228;
2. College of Food Science and Technology, Hainan University, Haikou 570228, China

摘要: 提取精氨酸脱亚胺酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀法初步分离精氨酸脱亚胺酶,然后通过DEAESephadex A 50柱色谱层析和Sephadex G-100柱色谱层析进一步分离纯化精氨酸脱亚胺酶,并利用SDS-PAGE电泳法来鉴定其纯度,最终达到纯化产碱假单胞菌来源的精氨酸脱亚胺酶（ADI）的目的。结果表明:分离纯化过程中,粗酶液的总酶活为424.43 U,比酶活为0.42 U·mg^-1;盐析透析酶液的总酶活是222.10 U,比酶活为2.05 U·mg^-1;离子交换分析活性部位的总酶活为105.83 U,比酶活是5.61 U·mg^-1;凝胶渗透分析活性部位的总酶活为17.94 U,比酶活为11.80 U·mg^-1。纯化得到了电泳纯级别的ADI,其相对纯度为96%。因此,本研究方法可以得到较高纯度和酶活的精氨酸脱亚胺酶。
- 精氨酸脱亚胺酶 /
- 分离纯化 /
- 硫酸铵分级沉淀法 /
- 柱色谱层析
Abstract: Crude arginine deiminase（ ADI） enzyme was extracted from Pseudomonas alcaligenes,purified by using ammonium sulfate graded precipitation,and then further separated and purified by using DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-100 column chromatography to produce purified ADI. The purity of the purified ADI was determined by SDS-PAGE electrophoresis. The total enzyme activity of the ADI crude enzyme was detected to be 424. 43 U with a specific enzyme activity of 0. 42 U; the enzyme purified via salting out and dialysis had a total activity of 222. 10 U with a specific enzyme activity of 2. 05 U·mg^-1; the enzyme purified by ion exchange analysis showed a total activity of 105. 83 U at the active site and its specific enzyme activity was 5. 61 U·mg^-1; the enzyme purified through gel permeation chromatography had a total activity of 17. 94 U at the active site and its specific enzyme activity was 11. 80 U·mg^-1. The purified ADI had a relative purity of 96%,which can be used for electrophoresis. It is concluded that this method can be used to produce ADI with higher purity and activity.
- arginine deiminase /
- purification /
- ammonium sulfate graded precipitation /
- column chromatography

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[17]	刘文超, 刘寿柏, 梅文莉, 戴好富, 蒋昌顺. 柱花草次级代谢产物的分离鉴定及其抑菌活性 . 热带生物学报, 2016, 7(1): 92-98. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.01.016
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[20]	操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件优化 . 热带生物学报, 2015, 6(1): 53-58,64. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.01.008

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产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

1. 海南大学材料与化工学院, 海口 570228;

2. 海南大学食品学院, 海口 570228

基金项目:

海南省研究生创新科研课题(S17)

海南省教育厅项目(CXY20140012)

作者简介:
操凤(1986-),女,海南大学材料与化工学院2011级硕士研究生.E-mail:study_cf1986@163.com

通讯作者: 曹献英(1962-),女,研究员,博士生导师.研究方向:食品安全评价及天然活性物质抗肿瘤的研究.E-mail:cxying_02@163.com

收稿日期: 2015-06-19

中图分类号: Q93

关键词:

精氨酸脱亚胺酶 /

硫酸铵分级沉淀法 /

柱色谱层析

摘要: 提取精氨酸脱亚胺酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀法初步分离精氨酸脱亚胺酶,然后通过DEAESephadex A 50柱色谱层析和Sephadex G-100柱色谱层析进一步分离纯化精氨酸脱亚胺酶,并利用SDS-PAGE电泳法来鉴定其纯度,最终达到纯化产碱假单胞菌来源的精氨酸脱亚胺酶（ADI）的目的。结果表明:分离纯化过程中,粗酶液的总酶活为424.43 U,比酶活为0.42 U·mg^-1;盐析透析酶液的总酶活是222.10 U,比酶活为2.05 U·mg^-1;离子交换分析活性部位的总酶活为105.83 U,比酶活是5.61 U·mg^-1;凝胶渗透分析活性部位的总酶活为17.94 U,比酶活为11.80 U·mg^-1。纯化得到了电泳纯级别的ADI,其相对纯度为96%。因此,本研究方法可以得到较高纯度和酶活的精氨酸脱亚胺酶。

English Abstract

操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

引用本文:

操凤, 刘雪冰, 曹献英. 产碱假单胞菌精氨酸脱亚胺酶的纯化[J]. 热带生物学报, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

Citation:

CAO Feng, LIU Xuebing, CAO Xianying. Purification of Arginine Deiminase From Pseudomonas alcaligenes[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(4): 491-496. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.021

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