红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

彭存智; 李蕾; 刘志昕

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

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红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

彭存智, 李蕾, 刘志昕

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彭存智, 李蕾, 刘志昕. 红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析[J]. 热带生物学报, 2010, 1(1): 12-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

引用本文:

彭存智, 李蕾, 刘志昕. 红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析[J]. 热带生物学报, 2010, 1(1): 12-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

PENG Cun-zhi, LI Lei, LIU Zhi-xin. Comparison and Analysis of Protein Extraction from Rhizophora apiculata Bl[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 12-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

Citation:

PENG Cun-zhi, LI Lei, LIU Zhi-xin. Comparison and Analysis of Protein Extraction from Rhizophora apiculata Bl[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(1): 12-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部转基因植物及植物用微生物环境安全监督检验测试中心, 海南海口 571101;
2. 海南师范大学生命科学学院, 海南海口 571101

基金项目:

中国热带农业科学院中央公益性科研院所基本科研业务费专项支助(ITBBZX083)

详细信息

第一作者:
彭存智（1972－），男，贵州贵阳人，中国热带农业科学院热带生物技术研究所副研究员.

中图分类号: Q816

Comparison and Analysis of Protein Extraction from Rhizophora apiculata Bl

1. Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Environmental Safety Supervisionand Inspection Centre for Genetically Modified Plants and Microorganisms used in Plants, Ministry of Agriculture, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101 China;
2. Department of Biology, Hainan Normal University; Haikou 571158, China

摘要: 采用水溶液提取法(磷酸盐缓冲液系统)、三氯乙酸-丙酮沉淀法和Phenol改良提取法,对红树叶进行蛋白质提取,并比较分析了这3种方法的蛋白质提取率、完整性、溶解性等。结果表明:水溶液提取法得到的是胶状沉淀,基本为多糖类物质,蛋白质含量很低;三氯乙酸-丙酮沉淀法提取的蛋白质纯度较高,但双向电泳背景最低,提取率较低,蛋白质的完整性差;Phenol改良提取法的蛋白质提取率高,约为三氯乙酸-丙酮法的10倍,双向电泳凝胶背景比三氯乙酸-丙酮沉淀法要深,蛋白质的完整性好,能够被电泳分离的蛋白质点是三氯乙酸-丙酮沉淀法的7倍左右。Phenol改良提取法在蛋白质的提取率以及完整性方面远远高于其他2种蛋白质提取方法。
- 红树 /
- 蛋白质提取 /
- 双向电泳
Abstract: In order to extract high quality protein sample for two dimensional electrophoresis （2-DE） assay,aqueous solution method,trichloroacetic acid-aceton method and the advanced phenol isolated method were used to extract the proteins from Rhizophora apiculata Bl,and the harvest rate,the integrality and the solubility of the three methods were compared and analyzed. The results showed that the colloidal deposition,which was composed of polysaccharide but little of protein,was isolated by the aqueous solution method; the proteins,which were isolated by trichloroacetic acid-aceton method,was purer than that from others and the background in 2-DE was most clearest,but the integrality of protein sample was not enough for 2-DE; 800—1000 μg protein deposition could be harvested from 500 mg leaves material by the advanced phenol isolated method,and the protein spots which were detected on 2-DE gel map were seven times than that by trichloroacetic acid-aceton method. These data demonstrated that the advanced phenol extraction method was more excellent than others based on the great protein harvest ratio and integrality.
- Rhizophora apiculata Bl. /
- protein extraction /
- two-dimensional electrophoresis

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红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部转基因植物及植物用微生物环境安全监督检验测试中心, 海南海口 571101;

2. 海南师范大学生命科学学院, 海南海口 571101

基金项目:

中国热带农业科学院中央公益性科研院所基本科研业务费专项支助(ITBBZX083)

作者简介:
彭存智（1972－），男，贵州贵阳人，中国热带农业科学院热带生物技术研究所副研究员.

收稿日期: 2009-06-18

中图分类号: Q816

关键词:

红树 /

蛋白质提取 /

双向电泳

摘要: 采用水溶液提取法(磷酸盐缓冲液系统)、三氯乙酸-丙酮沉淀法和Phenol改良提取法,对红树叶进行蛋白质提取,并比较分析了这3种方法的蛋白质提取率、完整性、溶解性等。结果表明:水溶液提取法得到的是胶状沉淀,基本为多糖类物质,蛋白质含量很低;三氯乙酸-丙酮沉淀法提取的蛋白质纯度较高,但双向电泳背景最低,提取率较低,蛋白质的完整性差;Phenol改良提取法的蛋白质提取率高,约为三氯乙酸-丙酮法的10倍,双向电泳凝胶背景比三氯乙酸-丙酮沉淀法要深,蛋白质的完整性好,能够被电泳分离的蛋白质点是三氯乙酸-丙酮沉淀法的7倍左右。Phenol改良提取法在蛋白质的提取率以及完整性方面远远高于其他2种蛋白质提取方法。

English Abstract

Comparison and Analysis of Protein Extraction from Rhizophora apiculata Bl

1. Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Environmental Safety Supervisionand Inspection Centre for Genetically Modified Plants and Microorganisms used in Plants, Ministry of Agriculture, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101 China;

2. Department of Biology, Hainan Normal University; Haikou 571158, China

Received Date: 2009-06-18

Keywords:

Abstract: In order to extract high quality protein sample for two dimensional electrophoresis （2-DE） assay,aqueous solution method,trichloroacetic acid-aceton method and the advanced phenol isolated method were used to extract the proteins from Rhizophora apiculata Bl,and the harvest rate,the integrality and the solubility of the three methods were compared and analyzed. The results showed that the colloidal deposition,which was composed of polysaccharide but little of protein,was isolated by the aqueous solution method; the proteins,which were isolated by trichloroacetic acid-aceton method,was purer than that from others and the background in 2-DE was most clearest,but the integrality of protein sample was not enough for 2-DE; 800—1000 μg protein deposition could be harvested from 500 mg leaves material by the advanced phenol isolated method,and the protein spots which were detected on 2-DE gel map were seven times than that by trichloroacetic acid-aceton method. These data demonstrated that the advanced phenol extraction method was more excellent than others based on the great protein harvest ratio and integrality.

彭存智, 李蕾, 刘志昕. 红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析[J]. 热带生物学报, 2010, 1(1): 12-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

引用本文:

彭存智, 李蕾, 刘志昕. 红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析[J]. 热带生物学报, 2010, 1(1): 12-16. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.002

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