2011年 2卷 第2期
2011, 2(2): 97-100.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.018
摘要
PDF 267KB
摘要:
以头肾组织为材料,采用植物血球凝集素(phytohemagglutinin,PHA)、秋水仙素溶液腹腔注射和空气干燥制片法,对海南野生三斑石斑鱼(Epinephelus trimaculatus)的染色体组型进行研究,结果表明,海南野生三斑石斑鱼具有48条染色体,其核型公式为2n=48,48t,臂数NF=48。未发现与性别相关的异型染色体。基于目前已研究过的23种石斑鱼核型进行统计,推测2n=48,48t,NF=48可能为石斑鱼属的基本原始核型。
以头肾组织为材料,采用植物血球凝集素(phytohemagglutinin,PHA)、秋水仙素溶液腹腔注射和空气干燥制片法,对海南野生三斑石斑鱼(Epinephelus trimaculatus)的染色体组型进行研究,结果表明,海南野生三斑石斑鱼具有48条染色体,其核型公式为2n=48,48t,臂数NF=48。未发现与性别相关的异型染色体。基于目前已研究过的23种石斑鱼核型进行统计,推测2n=48,48t,NF=48可能为石斑鱼属的基本原始核型。
2011, 2(2): 101-106.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.008
摘要:
为了检测蔗糖-1-果糖基转移酶(1-SST)转化甘蔗的果聚糖种类和含量,本研究使用高效液相色谱(HPLC)建立了测定果糖、葡萄糖、蔗糖和3种低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖)含量的两个体系。甘蔗糖类提取采用超声波辅助水浸提法,实验以乙腈和水配比(V乙腈∶V水=87∶13;V乙腈∶V水=75∶25)作为流动相,Hydersir NH2柱作为分析柱,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测器为示差折光检测器。结果表明,糖类质量浓度在0.625～50 g.L-1内呈现良好的线性关系,相关系数在0.999 3以上,在转化1-SST的甘蔗中能够检测到蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的催化产物蔗果三糖(GF2),用此方法也可以较为准确地检测甘蔗茎杆节间其他糖类的组分及含量,可以用于甘蔗中糖类的定性和定量检测。
为了检测蔗糖-1-果糖基转移酶(1-SST)转化甘蔗的果聚糖种类和含量,本研究使用高效液相色谱(HPLC)建立了测定果糖、葡萄糖、蔗糖和3种低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖)含量的两个体系。甘蔗糖类提取采用超声波辅助水浸提法,实验以乙腈和水配比(V乙腈∶V水=87∶13;V乙腈∶V水=75∶25)作为流动相,Hydersir NH2柱作为分析柱,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测器为示差折光检测器。结果表明,糖类质量浓度在0.625～50 g.L-1内呈现良好的线性关系,相关系数在0.999 3以上,在转化1-SST的甘蔗中能够检测到蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶的催化产物蔗果三糖(GF2),用此方法也可以较为准确地检测甘蔗茎杆节间其他糖类的组分及含量,可以用于甘蔗中糖类的定性和定量检测。
2011, 2(2): 107-112.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.013
摘要:
利用抑制性差减杂交文库筛选到的1个被乙烯诱导并与已知植物促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MAPKK;MKK)同源的cDNA片段,通过RACE技术得到该基因的全长cDNA序列。生物信息学分析表明,该基因属于植物MAPKK的A亚族,具有植物MAPKK的磷酸化一致序列S/T*****S/T。利用半定量RT-PCR检测该基因的表达量在乙烯处理后增强,推测其在乙烯诱导途径中起重要作用。
利用抑制性差减杂交文库筛选到的1个被乙烯诱导并与已知植物促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MAPKK;MKK)同源的cDNA片段,通过RACE技术得到该基因的全长cDNA序列。生物信息学分析表明,该基因属于植物MAPKK的A亚族,具有植物MAPKK的磷酸化一致序列S/T*****S/T。利用半定量RT-PCR检测该基因的表达量在乙烯处理后增强,推测其在乙烯诱导途径中起重要作用。
2011, 2(2): 113-116.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.006
摘要:
重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsRNA原核表达载体。
重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsRNA原核表达载体。
2011, 2(2): 117-122.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.016
摘要:
为了鉴定巴西橡胶树中存在与JAZ蛋白特异性结合的蛋白,利用pGEX-6p-1载体构建橡胶JAZ(HbJAZ1)与GST(Glutathione S-transferase)融合表达载体,并成功转化大肠杆菌进行原核表达,同时利用谷胱甘肽-琼脂糖填料成功纯化gcHbJAZ1-GST融合表达蛋白。在纯化实验中,发现HbJAZ1融合表达蛋白在大肠杆菌原核表达中是难溶蛋白,大多存在于裂解菌液的沉淀物中。
为了鉴定巴西橡胶树中存在与JAZ蛋白特异性结合的蛋白,利用pGEX-6p-1载体构建橡胶JAZ(HbJAZ1)与GST(Glutathione S-transferase)融合表达载体,并成功转化大肠杆菌进行原核表达,同时利用谷胱甘肽-琼脂糖填料成功纯化gcHbJAZ1-GST融合表达蛋白。在纯化实验中,发现HbJAZ1融合表达蛋白在大肠杆菌原核表达中是难溶蛋白,大多存在于裂解菌液的沉淀物中。
2011, 2(2): 123-128.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.019
摘要:
为了评估我国斜带石斑鱼野生群体与人工繁殖群体的种质现状,采用19个微卫星标记对斜带石斑鱼南海野生群体和海南人工繁殖群体进行遗传多样性研究。结果显示,在野生和人工繁殖群体中,19个基因座位的有效等位基因数(Ne)分别为1.135 0～4.516 2和1.00 0～3.982 7;群体平均观测杂合度(Ho)分别为0.706 1和0.687 5;群体平均期望杂合度(He)分别为0.480 3和0.421 5;多态信息含量(PIC)分别为0.547 5和0.493 0;2个群体间的遗传相似系数(Gst)为0.979 4,遗传距离(D)为0.020 8。这表明斜带石斑鱼南海野生群体与人工繁殖群体的遗传多样性仍然比较丰富,人工繁殖群体没有出现明显的遗传分化和种质退化的现象。
为了评估我国斜带石斑鱼野生群体与人工繁殖群体的种质现状,采用19个微卫星标记对斜带石斑鱼南海野生群体和海南人工繁殖群体进行遗传多样性研究。结果显示,在野生和人工繁殖群体中,19个基因座位的有效等位基因数(Ne)分别为1.135 0～4.516 2和1.00 0～3.982 7;群体平均观测杂合度(Ho)分别为0.706 1和0.687 5;群体平均期望杂合度(He)分别为0.480 3和0.421 5;多态信息含量(PIC)分别为0.547 5和0.493 0;2个群体间的遗传相似系数(Gst)为0.979 4,遗传距离(D)为0.020 8。这表明斜带石斑鱼南海野生群体与人工繁殖群体的遗传多样性仍然比较丰富,人工繁殖群体没有出现明显的遗传分化和种质退化的现象。
2011, 2(2): 129-132.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.009
摘要:
用原位PCR技术将木薯延长因子基因(MeEFⅠ)定位到木薯染色体上,根据MeEFⅠ基因的全长cDNA序列设计该基因的特异引物,以华南6号木薯根尖为材料制备染色体标本,结果表明:通过原位PCR检测发现,在木薯细胞不同时期的分裂相上均能发现1～2个荧光信号位点;通过核型分析,初步将木薯MeEFⅠ基因定位于华南6号木薯的第10号染色体的短臂上,基因位点到着丝粒的百分距离是35.11。
用原位PCR技术将木薯延长因子基因(MeEFⅠ)定位到木薯染色体上,根据MeEFⅠ基因的全长cDNA序列设计该基因的特异引物,以华南6号木薯根尖为材料制备染色体标本,结果表明:通过原位PCR检测发现,在木薯细胞不同时期的分裂相上均能发现1～2个荧光信号位点;通过核型分析,初步将木薯MeEFⅠ基因定位于华南6号木薯的第10号染色体的短臂上,基因位点到着丝粒的百分距离是35.11。
2011, 2(2): 133-137.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.010
摘要:
报道天然彩色棉纤维特异表达启动子LTP3,大小为1 548 bp。经测序分析,与GenBank中登录的海岛棉(Gossypium hirutum L.DES119)特异表达启动子序列同源性为99%,仅有个别碱基发生改变,而启动子的基本元件未发生突变。将克隆的启动子与报告基因GUS融合,构建植物表达载体pBI-LTP3,并转化烟草。结果表明GUS基因仅在转基因烟草叶片表皮毛中表达。
报道天然彩色棉纤维特异表达启动子LTP3,大小为1 548 bp。经测序分析,与GenBank中登录的海岛棉(Gossypium hirutum L.DES119)特异表达启动子序列同源性为99%,仅有个别碱基发生改变,而启动子的基本元件未发生突变。将克隆的启动子与报告基因GUS融合,构建植物表达载体pBI-LTP3,并转化烟草。结果表明GUS基因仅在转基因烟草叶片表皮毛中表达。
2011, 2(2): 138-142.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.011
摘要:
研究了不同提取方法和不同生长时期甘蔗提取的DNA对转基因甘蔗植株PCR检测的影响。结果表明,幼苗时期提取的甘蔗叶片模板DNA质量高于田间成熟植株;甘蔗幼苗时期的PCR检测易于成熟植株;CTAB法、SDS法和CTAB-SDS法提取的甘蔗叶片DNA均能满足幼苗期甘蔗抗性植株的PCR检测要求;对成熟转基因甘蔗植株而言,以CTAB-SDS法提取的DNA进行PCR检测的效果最佳。
研究了不同提取方法和不同生长时期甘蔗提取的DNA对转基因甘蔗植株PCR检测的影响。结果表明,幼苗时期提取的甘蔗叶片模板DNA质量高于田间成熟植株;甘蔗幼苗时期的PCR检测易于成熟植株;CTAB法、SDS法和CTAB-SDS法提取的甘蔗叶片DNA均能满足幼苗期甘蔗抗性植株的PCR检测要求;对成熟转基因甘蔗植株而言,以CTAB-SDS法提取的DNA进行PCR检测的效果最佳。
2011, 2(2): 143-147.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.012
摘要:
以广藿香幼嫩叶片为外植体,通过愈伤组织途经诱导出大量丛生芽,然后将丛生芽分别转接到含有不同质量浓度6-BA的增殖培养基和含有不同质量浓度IBA的生根培养基上,筛选出最适增殖培养基:MS+6-BA 0.1～0.2 mg.L-1,最适生根培养基:1/2 MS+IBA 0.25～1.0 mg.L-1。广藿香组培苗株高达5～6 cm时进行炼苗移栽,移栽成活率高达95%。
以广藿香幼嫩叶片为外植体,通过愈伤组织途经诱导出大量丛生芽,然后将丛生芽分别转接到含有不同质量浓度6-BA的增殖培养基和含有不同质量浓度IBA的生根培养基上,筛选出最适增殖培养基:MS+6-BA 0.1～0.2 mg.L-1,最适生根培养基:1/2 MS+IBA 0.25～1.0 mg.L-1。广藿香组培苗株高达5～6 cm时进行炼苗移栽,移栽成活率高达95%。
2011, 2(2): 148-152.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.007
摘要:
采用三抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA)和双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测了海南主要兰花种植基地的疑似病毒感染的兰花叶片。结果表明,海南兰花病原病毒主要为建兰花叶病毒(Cym-bidium mosaic virus,CymMV)、齿兰环斑病毒(Odontoglossum ring-spot virus,ORSV),以及二者复合感染;感染建兰花叶病毒的植株比感染齿兰环斑病毒的植株多。该法具有较高的灵敏度、准确性和特异性,可应用于兰花CymMV和ORSV 2种病毒的早期诊断和检测。
采用三抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA)和双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测了海南主要兰花种植基地的疑似病毒感染的兰花叶片。结果表明,海南兰花病原病毒主要为建兰花叶病毒(Cym-bidium mosaic virus,CymMV)、齿兰环斑病毒(Odontoglossum ring-spot virus,ORSV),以及二者复合感染;感染建兰花叶病毒的植株比感染齿兰环斑病毒的植株多。该法具有较高的灵敏度、准确性和特异性,可应用于兰花CymMV和ORSV 2种病毒的早期诊断和检测。
2011, 2(2): 153-156.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.014
摘要:
以芦笋植株叶片为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法3种提取DNA的方法,并利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA质量,探索最佳的芦笋DNA提取方法。结果表明:上述3种方法都适合于芦笋DNA的提取,提取的DNA均能够满足ISSR分子标记等试验的需要。
以芦笋植株叶片为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法3种提取DNA的方法,并利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA质量,探索最佳的芦笋DNA提取方法。结果表明:上述3种方法都适合于芦笋DNA的提取,提取的DNA均能够满足ISSR分子标记等试验的需要。
2011, 2(2): 157-163.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.017
摘要:
参考牛的Hoxc8基因序列设计引物,扩增正常蒙古羊(胸椎数13)和多脊椎蒙古羊(胸椎数14)Hoxc8的exon-1和exon-2基因,对得到的序列进行生物信息学分析。结果表明,经序列比对二者的DNA序列,除两侧个别碱基有差异外,中间序列完全一致。蒙古羊Hoxc8的exon-1和exon-2序列分别与其他物种进行同源性比对,蒙古羊Hoxc8 exon-1与人、小鼠、大鼠、犬的同源性达到96%以上,与斑马鱼的同源性为75.8%;exon-2与大猩猩、犬、人、小鼠、大鼠的同源性达到91%以上,与斑马鱼的同源性为74%。
参考牛的Hoxc8基因序列设计引物,扩增正常蒙古羊(胸椎数13)和多脊椎蒙古羊(胸椎数14)Hoxc8的exon-1和exon-2基因,对得到的序列进行生物信息学分析。结果表明,经序列比对二者的DNA序列,除两侧个别碱基有差异外,中间序列完全一致。蒙古羊Hoxc8的exon-1和exon-2序列分别与其他物种进行同源性比对,蒙古羊Hoxc8 exon-1与人、小鼠、大鼠、犬的同源性达到96%以上,与斑马鱼的同源性为75.8%;exon-2与大猩猩、犬、人、小鼠、大鼠的同源性达到91%以上,与斑马鱼的同源性为74%。
2011, 2(2): 164-166.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.015
摘要:
为了促进菠萝皮中果胶的提取,对采用酸解法处理后的菠萝皮酸解液作进一步的纤维素酶酶解处理,且初步确定此工艺的最佳酶解条件:酶解温度为55℃,菠萝皮酸解液pH值为4.2,单位菠萝皮酸解液中纤维素酶用量为15.5 U·mL-1,酶解时间为140 min。在此工艺条件下,酶解液中果胶含量可达7.4 g·L-1,比菠萝皮酸解液中的果胶含量提高了40.7%。
为了促进菠萝皮中果胶的提取,对采用酸解法处理后的菠萝皮酸解液作进一步的纤维素酶酶解处理,且初步确定此工艺的最佳酶解条件:酶解温度为55℃,菠萝皮酸解液pH值为4.2,单位菠萝皮酸解液中纤维素酶用量为15.5 U·mL-1,酶解时间为140 min。在此工艺条件下,酶解液中果胶含量可达7.4 g·L-1,比菠萝皮酸解液中的果胶含量提高了40.7%。
2011, 2(2): 167-171.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.003
摘要:
对海口市海防林带木麻黄林、景观林和无林空地的土壤容重、pH值、含盐量、含水量、有机质及N、P、K等理化指标进行测定,并采用内梅罗修正指数对土壤参测指标进行综合评价。结果表明,海口市沙质海岸防护林带土壤pH值为中性;有效氮含量处于中等水平;有效磷和有效钾含量偏低;有机质含量严重缺乏;景观林土壤理化指标远优于其他2种林地;土壤有机质、含水量等与其他指标间都存在极显著的相关关系;海口海岸防护林带整体土壤肥力属于贫瘠水平;影响防护林土壤肥力高低的主要因子是有机质。
对海口市海防林带木麻黄林、景观林和无林空地的土壤容重、pH值、含盐量、含水量、有机质及N、P、K等理化指标进行测定,并采用内梅罗修正指数对土壤参测指标进行综合评价。结果表明,海口市沙质海岸防护林带土壤pH值为中性;有效氮含量处于中等水平;有效磷和有效钾含量偏低;有机质含量严重缺乏;景观林土壤理化指标远优于其他2种林地;土壤有机质、含水量等与其他指标间都存在极显著的相关关系;海口海岸防护林带整体土壤肥力属于贫瘠水平;影响防护林土壤肥力高低的主要因子是有机质。
2011, 2(2): 172-177.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.001
摘要:
采用线路调查和标准调查相结合的方法,对广东中山市五桂山生态保护区的昆虫多样性进行了专项调查、采集。采集后的昆虫及时制成针插标本;一些常见昆虫种类,对照专业昆虫图鉴进行形态鉴定;无法鉴定的,则送国内昆虫分类专家鉴定。共制成昆虫标本4万余号,其中本文报道的鳞翅目蛾类昆虫种类共计29科286种。
采用线路调查和标准调查相结合的方法,对广东中山市五桂山生态保护区的昆虫多样性进行了专项调查、采集。采集后的昆虫及时制成针插标本;一些常见昆虫种类,对照专业昆虫图鉴进行形态鉴定;无法鉴定的,则送国内昆虫分类专家鉴定。共制成昆虫标本4万余号,其中本文报道的鳞翅目蛾类昆虫种类共计29科286种。
2011, 2(2): 178-186.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.004
摘要:
在对中国香蕉专业合作社进行深入访谈和问卷调查的基础上,利用层次分析法对香蕉专业合作的绩效进行实证研究。结果表明:虽然目前合作社整体绩效水平不高,但合作社能在一定程度上解决香蕉产业发展过程中存在的困难和问题,提高了香蕉产业的规模化和组织化程度,相信随着香蕉产业的升级和政府扶持力度的加大,香蕉专业合作社会有较大较快的发展。
在对中国香蕉专业合作社进行深入访谈和问卷调查的基础上,利用层次分析法对香蕉专业合作的绩效进行实证研究。结果表明:虽然目前合作社整体绩效水平不高,但合作社能在一定程度上解决香蕉产业发展过程中存在的困难和问题,提高了香蕉产业的规模化和组织化程度,相信随着香蕉产业的升级和政府扶持力度的加大,香蕉专业合作社会有较大较快的发展。
2011, 2(2): 187-192.
doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.002
摘要:
阐述了植物内源小RNA的种类及其介导的多种RNA基因沉默途径,RNA沉默途径中的主要效应蛋白及复合物的组成和功能,重点介绍了miRNA介导的基因沉默途径和siRNA介导的基因沉默途径的异同及其功能,为便于了解植物基因表达调控的多层次性和复杂性,进一步挖掘和利用植物内源信号途径提供一定的参考。
阐述了植物内源小RNA的种类及其介导的多种RNA基因沉默途径,RNA沉默途径中的主要效应蛋白及复合物的组成和功能,重点介绍了miRNA介导的基因沉默途径和siRNA介导的基因沉默途径的异同及其功能,为便于了解植物基因表达调控的多层次性和复杂性,进一步挖掘和利用植物内源信号途径提供一定的参考。
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