斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析

高品; 魏京广; 许濛; 陈秀丽; 秦启伟; 周永灿

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

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斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析

高品, 魏京广, 许濛, 陈秀丽, 秦启伟, 周永灿

文章导航 > 热带生物学报（中英文） > 2016 > 7(3): 285-289

高品, 魏京广, 许濛, 陈秀丽, 秦启伟, 周永灿. 斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析[J]. 热带生物学报（中英文）, 2016, 7(3): 285-289. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

引用本文:

GAO Pin, WEI Jingguang, XU Meng, CHEN Xiuli, QIN Qiwei, ZHOU Yongcan. Molecular Cloning,Expression and Subcellular Localization of PKR from Epinephelus coioides[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(3): 285-289. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

Citation:

GAO Pin, WEI Jingguang, XU Meng, CHEN Xiuli, QIN Qiwei, ZHOU Yongcan. Molecular Cloning,Expression and Subcellular Localization of PKR from Epinephelus coioides[J]. Journal of Tropical Biology, 2016, 7(3): 285-289. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

高品¹,
魏京广^2,3,
许濛¹,
陈秀丽^2,3,
秦启伟^2,3,,
周永灿^1,

1. 海南大学海洋学院/海南省热带水生生物技术重点实验室, 海口 570228;
2. 中国科学院南海海洋研究所/中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室, 广州 510301;
3. 中国科学院南海海洋研究所/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301

基金项目:

国家科技计划项目973计划(2012CB114402)

国家科技计划项目863计划(2012AA092201)

高等学校博士学科点基金(20124601110006)

广东省科技计划项目(2014B030301064)

国家自然科学基金(31260644,31202022)

国家科技支撑计划星火计划项目(2013GA780001)

国家海洋公益性项目(201205025)

详细信息

第一作者:
高品(1991-),男,海南大学海洋学院2012级硕士研究生.E-mail:740686449@qq.com

通信作者:
秦启伟(1964-),男,研究员.研究方向:分子病毒学与功能基因组学.E-mail:qinqw@scsio.ac.cn

周永灿(1968-),男,教授,研究方向:水产病害.E-mail:zychnu@163.com

中图分类号: S965.334

Molecular Cloning,Expression and Subcellular Localization of PKR from Epinephelus coioides

GAO Pin¹,
WEI Jingguang^2,3,
XU Meng¹,
CHEN Xiuli^2,3,
QIN Qiwei^{2,3
,},
ZHOU Yongcan^1
,

1. College of Marine Sciences, Hainan University/Hainan Key Laboratory of Tropical Aquatic Biotechnology, Haikou, Hainan 570228, China;
2. Key Laboratory of Marine Bio-resources Sustainable Utilization, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301;
3. Guangdong Key Laboratory of Applied Marine Biology, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou, Guangdong 510301, China

摘要: 根据实验室前期获得的斜带石斑鱼PKR基因的全长c DNA,对其原核表达、组织分布及亚细胞定位进行了研究分析。结果表明,斜带石斑鱼PKR基因c DNA全长为2 151 bp,其中ORF区为1 863 bp,编码621个氨基酸,表达蛋白的分子质量大小为70 157.15 Da,PI为5.72。通过NCBI网站上BLAST软件比对发现,斜带石斑鱼PKR与其他物种的PKR高度同源。通过构建原核表达载体PKR-p ET-32a,获得了斜带石斑鱼PKR的融合蛋白,经纯化后制备了斜带石斑鱼PKR鼠抗血清。利用荧光定量PCR对斜带石斑鱼PKR基因组织分布研究表明,该基因在所有检测组织中均有表达,其中肠的表达量最高,头肾次之。以荧光显微镜对其亚细胞定位进行了分析,该基因为全细胞分布,但主要分布于细胞质中。
- 斜带石斑鱼 /
- 克隆表达 /
- 亚细胞定位 /
- PKR基因
Abstract: The full length c DNA of PKR gene was cloned from the liver of grouper,Epinephelus coioides,which is 2 151 bp,including 1 863 bp ORF area,encoding 621 amino acids. Its protein molecular weight is 70 157.15 Daltons and PI is 5. 72. BLAST comparison on the NCBI web site found that the PKR of the grouper was highly homologous to that of other species. By constructing prokaryotic expression vector PKR-p ET-32 a,the fusion protein of PKR was obtained and purified. The mouse antiserum of PKR was also prepared. Real-time PCR analysis indicates that the PKR gene is expressed in all tissues of the grouper,most highly in the intestine and then in the head kidney. Subcellular localization of PKR showed that PKR was distributed in both nucleus and cytoplasm,but mainly in the cytoplasm.
- Epinephelus coioides /
- molecular cloning /
- subcellular localization /
- PKR

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[2]	谭舒畅, 孙铭奇, 李彦. 水稻香叶醇合成酶的筛选与功能鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(1): 57-65. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240074
[3]	张龙婷, 郑智, 王尧, 高煜杰. 鞍带石斑鱼MRFs基因cDNA克隆及组织表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2026, 17(3): 508-522. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20250030
[4]	咸利民, 金海峰, 侯清芳, 彭晓莹, 宁恒亨, 李芬, 吴少英. 普通大蓟马视觉基因的克隆与表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2024, 15(5): 615-622. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20240029
[5]	王田, 符俐盈, 赵阳, 刘爽, 张玉芳, 陈代朋, 郑丽. 香蕉枯萎病菌候选效应蛋白FoSSP20的鉴定和功能初探 . 热带生物学报（中英文）, 2024, 15(1): 85-93. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.20230045
[6]	门佳丽, 李芳, 孙进华, 许云. 荔枝‘妃子笑’AP2同源基因的克隆及表达 . 热带生物学报（中英文）, 2020, 11(2): 190-199. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.02.009
[7]	任宁, 陈秀珍, 夏幽泉, 白雪杨, 江行玉, 周扬. 木薯MeNRT2.5基因的克隆及表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2019, 10(2): 111-118. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.003
[8]	王丹阳, 范亚飞, 周扬, 罗明华, 江行玉, 罗越华, 夏幽泉. 水稻OsNHX5基因的亚细胞定位及表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2019, 10(2): 106-110,134. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2019.02.002
[9]	唐枝娟, 朱寿松, 于心怡, 赵锐, 牛晓磊, 陈银华, 耿梦婷. 木薯MeRbohE基因的克隆及表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2018, 9(2): 170-175. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.02.007
[10]	闫冰玉, 巩笑笑, 谭玉荣, 王鹏, 李双江, 潘英文, 刘进平. 文心兰OnRR9基因克隆及表达 . 热带生物学报（中英文）, 2018, 9(4): 393-400. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2018.04.005
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[12]	徐伊桦, 苏永全, 毛勇, 宋晓红, 张曼, 王军, 王春忠, 郑志鹏. 日本囊对虾ML基因的克隆与表达分析 . 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(4): 365-373. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.04.003
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[14]	肖华, 林云蒸, 姚笛, 欧阳沫, 黄惜. 巴西橡胶树锌指蛋白基因的克隆及功能鉴定 . 热带生物学报（中英文）, 2015, 6(2): 113-118. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2015.02.002
[15]	冯煜, 吴小易, 陈国华, 王珺, 李伟峰, 朱仙龙. 饲料中大豆卵磷脂/鱼油比例对斜带石斑鱼稚鱼生长发育及肠道组织的影响(英文) . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(2): 111-118. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.02.018
[16]	吴廷昌, 冯煜, 骆剑, 刘扬溪, 黄飞, 陈国华. 斜带石斑鱼工厂化育苗水体理化因子分析 . 热带生物学报（中英文）, 2013, 4(1): 1-6. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2013.01.014
[17]	周翰林, 杨森, 高川, 张磊, 张海发, 李水生, 张勇, 蒙子宁, 刘晓春, 林浩然. 两种杂交石斑鱼子一代及其亲本的线粒体COⅠ基因遗传变异分析 . 热带生物学报（中英文）, 2012, 3(1): 1-10. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2012.01.016
[18]	王永波, 符书源, 李丙顺, 郑飞, 王国福, 李向民. 池塘养殖石斑鱼鱼蛭病防治实验 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(1): 59-62. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.01.018
[19]	骆剑, 黄宗文, 陈国华, 王珺, 杨薇, 郭仁湘. 南海斜带石斑鱼野生群体与人工繁殖群体的微卫星分析 . 热带生物学报（中英文）, 2011, 2(2): 123-128. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2011.02.019
[20]	林生, 潘大仁, 周以飞, 陈观水, 张绪璋, 吴子峰. 果蔗SoSgt1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建 . 热带生物学报（中英文）, 2010, 1(1): 1-7. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.01.010

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斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

1. 海南大学海洋学院/海南省热带水生生物技术重点实验室, 海口 570228;

2. 中国科学院南海海洋研究所/中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室, 广州 510301;

3. 中国科学院南海海洋研究所/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301

基金项目:

国家科技计划项目973计划(2012CB114402)

国家科技计划项目863计划(2012AA092201)

高等学校博士学科点基金(20124601110006)

广东省科技计划项目(2014B030301064)

国家自然科学基金(31260644,31202022)

国家科技支撑计划星火计划项目(2013GA780001)

国家海洋公益性项目(201205025)

作者简介:
高品(1991-),男,海南大学海洋学院2012级硕士研究生.E-mail:740686449@qq.com

通讯作者: 秦启伟(1964-),男,研究员.研究方向:分子病毒学与功能基因组学.E-mail:qinqw@scsio.ac.cn; 周永灿(1968-),男,教授,研究方向:水产病害.E-mail:zychnu@163.com

收稿日期: 2015-07-26

中图分类号: S965.334

关键词:

摘要: 根据实验室前期获得的斜带石斑鱼PKR基因的全长c DNA,对其原核表达、组织分布及亚细胞定位进行了研究分析。结果表明,斜带石斑鱼PKR基因c DNA全长为2 151 bp,其中ORF区为1 863 bp,编码621个氨基酸,表达蛋白的分子质量大小为70 157.15 Da,PI为5.72。通过NCBI网站上BLAST软件比对发现,斜带石斑鱼PKR与其他物种的PKR高度同源。通过构建原核表达载体PKR-p ET-32a,获得了斜带石斑鱼PKR的融合蛋白,经纯化后制备了斜带石斑鱼PKR鼠抗血清。利用荧光定量PCR对斜带石斑鱼PKR基因组织分布研究表明,该基因在所有检测组织中均有表达,其中肠的表达量最高,头肾次之。以荧光显微镜对其亚细胞定位进行了分析,该基因为全细胞分布,但主要分布于细胞质中。

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斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

第一作者: 高品(1991-),男,海南大学海洋学院2012级硕士研究生.E-mail:740686449@qq.com

通信作者: 秦启伟(1964-),男,研究员.研究方向:分子病毒学与功能基因组学.E-mail:qinqw@scsio.ac.cn 周永灿(1968-),男,教授,研究方向:水产病害.E-mail:zychnu@163.com

Molecular Cloning,Expression and Subcellular Localization of PKR from Epinephelus coioides

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斜带石斑鱼PKR基因的克隆表达及亚细胞定位分析

DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2016.03.001

作者简介: 高品(1991-),男,海南大学海洋学院2012级硕士研究生.E-mail:740686449@qq.com

通讯作者: 秦启伟(1964-),男,研究员.研究方向:分子病毒学与功能基因组学.E-mail:qinqw@scsio.ac.cn; 周永灿(1968-),男,教授,研究方向:水产病害.E-mail:zychnu@163.com

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第一作者:
高品(1991-),男,海南大学海洋学院2012级硕士研究生.E-mail:740686449@qq.com

通信作者:
秦启伟(1964-),男,研究员.研究方向:分子病毒学与功能基因组学.E-mail:qinqw@scsio.ac.cn

周永灿(1968-),男,教授,研究方向:水产病害.E-mail:zychnu@163.com

作者简介:
高品(1991-),男,海南大学海洋学院2012级硕士研究生.E-mail:740686449@qq.com