噬菌体基因组DNA快速提取方法

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噬菌体基因组DNA快速提取方法

刘秋婷, 田雨顺, 云龙, 罗鹏, 胡超群

文章导航 > 热带生物学报 > 2017 > 8(2): 232-235

刘秋婷, 田雨顺, 云龙, 罗鹏, 胡超群. 噬菌体基因组DNA快速提取方法[J]. 热带生物学报, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

引用本文:

刘秋婷, 田雨顺, 云龙, 罗鹏, 胡超群. 噬菌体基因组DNA快速提取方法[J]. 热带生物学报, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

LIU Qiuting, TIAN Yushun, YUN Long, LUO Peng, HU Chaoqun. Development of aRapid Method for Extraction of Genomic DNAs of Bacteriophages[J]. Journal of Tropical Biology, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

Citation:

LIU Qiuting, TIAN Yushun, YUN Long, LUO Peng, HU Chaoqun. Development of aRapid Method for Extraction of Genomic DNAs of Bacteriophages[J]. Journal of Tropical Biology, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

噬菌体基因组DNA快速提取方法

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

刘秋婷^1,2,
田雨顺^1,2,
云龙^1,2,
罗鹏^1, ,,
胡超群¹

1. 中国科学院南海海洋研究所/中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301;
2. 中国科学院大学, 北京 101408

基金项目:

国家自然科学基金青年科学基金项目(31370149)

第一作者:
刘秋婷(1992-),女,中国科学院大学南海海洋研究所2014级硕士研究生.E-mail:liuqiuting66@163.com

通信作者:
罗鹏(1977-),男,博士,副研究员.研究方向:海洋细菌分子遗传学.E-mail:luopeng@scsio.ac.cn

中图分类号: Q78

Development of aRapid Method for Extraction of Genomic DNAs of Bacteriophages

LIU Qiuting^1,2,
TIAN Yushun^1,2,
YUN Long^1,2,
LUO Peng^{1
, ,},
HU Chaoqun¹

1. South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences (CAS)/Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology, CAS/Guangdong Key Laboratory of Applied Marine Biology,, Guangzhou, Guangdong 510301, China;
2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 101408, China

摘要: 针对传统噬菌体基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,并且提取中用到酚/氯仿抽提,操作步骤繁琐,会对操作人员身体造成一定程度的损伤等不足,笔者建立了1种噬菌体基因组DNA快速提取方法。其提取的主要步骤包括宿主核酸降解、噬菌体粒子沉淀、噬菌体DNA释放、杂质去除、DNA吸附、DNA清洗和DNA洗脱等。结果表明,通过此法能快速提取以溶藻弧菌、大肠杆菌和阴沟肠杆菌为宿主菌的多种噬菌体基因组DNA,最快可以在2 h内完成,而且提取的产量和纯度均较高,DNA浓度超过100 ng·μL^-1,OD_260/280达到1.8以上,提取产物不受宿主菌基因组DNA污染,可用于下游的实验分析。
- 噬菌体基因组DNA /
- 快速提取方法 /
- 核酸降解 /
- 噬菌体粒子沉淀
Abstract: Molecular biologicresearch on bacteriophages is primarily based on genomic DNA extraction. The traditional DNA extraction for bacteriophages is complicated in operation andthe use of phenol and chloroform in the DNA extraction is harmful to operator. A new rapid method for bacteriophage genome DNA extraction was developed. Procedures in the method includes nucleic acid degradation of host strains,bacteriophage precipitation,bacteriophage DNA release,impurity removal DNA adsorption,DNA washing,and DNA elution. The results indicated that bacteriophagegenomic DNAs,the host strains of which are Vibrio alginolyticus,Escherichia coli and Enterobacter cloacae,respectively,were extractedin two hours at the soonest,with the yield and purity of genomic DNAsbeing up to 100 ng·μL^-1and 1. 8( OD_260/280),respectively. This extraction method can prevent the DNA contamination from the host strains,and thus the extractedgenomic DNA of bacteriophagescan be used in further experiments.
- bacteriophagegenomic DNA /
- rapid extraction /
- nucleic acid degradation /
- bacteriophage precipitation

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噬菌体基因组DNA快速提取方法

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

1. 中国科学院南海海洋研究所/中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室, 广州 510301;

2. 中国科学院大学, 北京 101408

基金项目:

国家自然科学基金青年科学基金项目(31370149)

作者简介:
刘秋婷(1992-),女,中国科学院大学南海海洋研究所2014级硕士研究生.E-mail:liuqiuting66@163.com

通讯作者: 罗鹏(1977-),男,博士,副研究员.研究方向:海洋细菌分子遗传学.E-mail:luopeng@scsio.ac.cn

收稿日期: 2017-01-20
修回日期: 2017-02-25

中图分类号: Q78

关键词:

噬菌体基因组DNA /

快速提取方法 /

噬菌体粒子沉淀

摘要: 针对传统噬菌体基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,并且提取中用到酚/氯仿抽提,操作步骤繁琐,会对操作人员身体造成一定程度的损伤等不足,笔者建立了1种噬菌体基因组DNA快速提取方法。其提取的主要步骤包括宿主核酸降解、噬菌体粒子沉淀、噬菌体DNA释放、杂质去除、DNA吸附、DNA清洗和DNA洗脱等。结果表明,通过此法能快速提取以溶藻弧菌、大肠杆菌和阴沟肠杆菌为宿主菌的多种噬菌体基因组DNA,最快可以在2 h内完成,而且提取的产量和纯度均较高,DNA浓度超过100 ng·μL^-1,OD_260/280达到1.8以上,提取产物不受宿主菌基因组DNA污染,可用于下游的实验分析。

English Abstract

刘秋婷, 田雨顺, 云龙, 罗鹏, 胡超群. 噬菌体基因组DNA快速提取方法[J]. 热带生物学报, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

引用本文:

刘秋婷, 田雨顺, 云龙, 罗鹏, 胡超群. 噬菌体基因组DNA快速提取方法[J]. 热带生物学报, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

LIU Qiuting, TIAN Yushun, YUN Long, LUO Peng, HU Chaoqun. Development of aRapid Method for Extraction of Genomic DNAs of Bacteriophages[J]. Journal of Tropical Biology, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

Citation:

LIU Qiuting, TIAN Yushun, YUN Long, LUO Peng, HU Chaoqun. Development of aRapid Method for Extraction of Genomic DNAs of Bacteriophages[J]. Journal of Tropical Biology, 2017, 8(2): 232-235. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.02.018

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