金钗石斛类原球茎原生质体的分离

刘运权; 张翠焕; 闻真珍; 黎扬辉; 刘伟

doi:10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

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金钗石斛类原球茎原生质体的分离

刘运权, 张翠焕, 闻真珍, 黎扬辉, 刘伟

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刘运权, 张翠焕, 闻真珍, 黎扬辉, 刘伟. 金钗石斛类原球茎原生质体的分离[J]. 热带生物学报, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

引用本文:

刘运权, 张翠焕, 闻真珍, 黎扬辉, 刘伟. 金钗石斛类原球茎原生质体的分离[J]. 热带生物学报, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

LIU Yunquan, ZHANG Cuihuan, WEN Zhenzhen, LI Yanghui, LIU Wei. Isolation of the Protoplast from Dendrobium Nobile Lind1 PLBs[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

Citation:

LIU Yunquan, ZHANG Cuihuan, WEN Zhenzhen, LI Yanghui, LIU Wei. Isolation of the Protoplast from Dendrobium Nobile Lind1 PLBs[J]. Journal of Tropical Biology, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

金钗石斛类原球茎原生质体的分离

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

刘运权^1,2,
张翠焕^1,2,
闻真珍^1,2,
黎扬辉³,
刘伟^1,2, ,

1. 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室, 广东广州 510642;
2. 华南农业大学生命科学学院, 广东广州 510642;
3. 广州花卉研究中心, 广东广州 510360

基金项目:

广州市农业科技招标项目(GK0401004)

广东省农业科技项目(200844507)

详细信息

第一作者:
刘运权(1980-), 男, 广东韶关人, 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室助理实验师.

通信作者:
刘伟,教授.E-mail:liuwei@scau.edu.cn,联系电话:020-38297712

中图分类号: Q943.1;S 682.31

Isolation of the Protoplast from Dendrobium Nobile Lind1 PLBs

LIU Yunquan^1,2,
ZHANG Cuihuan^1,2,
WEN Zhenzhen^1,2,
LI Yanghui³,
LIU Wei^{1,2
, ,}

1. Key Lab Plant Funct Genom & Biotechnol, Educ Dept of Guangdong Prov, Guangzhou 510642, China;
2. College of Life Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;
3. Guangzhou Flower Research Center, Guangzhou 510360, China

摘要: 以具有较多生长点的金钗石斛PLBs为材料,研究通过酶解法获得原生质体的适宜条件。结果表明,酶液配比为φ=1%纤维素酶(Cellulase Onozuka R10)+φ=0.4%果胶酶(Macerozyme Onozuka R10)+0.65mol·L^-1甘露醇,pH5.7;黑暗条件下,(25±2)℃,60r·min^-1振荡酶解6h,800r·min^-1离心分离4min,获得的原生质体质量较好。经计数和伊凡蓝染色法检测,用此法获得的金钗石斛PLBs原生质体鲜质量产量为(8.25±0.17)×10⁵个.g^-1,活性为(90.24±1.84)。(蓝光(470～75nm)激发活力检测发现较小的分生细胞具有较强的活力。
- 金钗石斛 /
- PLBs /
- 原生质体 /
- 分离
Abstract: In order to obtain regeneration Dendrobium nobile Lind1 through protoplast isolation and cultivation,protoplasts were isolated from PLBs of Dendrobium nobile Lind1. The effects of various factors （composition of enzymes,digestion time,concentrations of osmotic pressure stabilize （mannitol）,centrifugation speed,purification methods,pretreatment of the material and the methods of vigor test） on the yield,viability and division of protoplasts were investigated. The results indicated that the optimum condition for protoplast isolation was established by using 1% cellulase R-10 and 0.4% macerozyme R-10 in 0.65 mol·L^-1 mannitol （pH5.7） solution for cell wall digestion; the mixture of PLBs and enzyme solution was incubated at （25±2）℃ in dark for 6h on a rotary shaker with an agitation speed of 60 rpm,with adoption of 50—100μm filters to remove undigested tissues and debris,and after centrifugated at 800 rpm for 4min,the maximum yield （8.25±0.17）×10⁵ per gram PLBs and the high viability （90.24±1.84）% were obtained. These data suggested that the small meristem cells of PLBs were good source of intact protoplast.
- Dendrobium nobile Lindl. /
- PLBs /
- protoplast /
- isolation

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金钗石斛类原球茎原生质体的分离

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

1. 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室, 广东广州 510642;

2. 华南农业大学生命科学学院, 广东广州 510642;

3. 广州花卉研究中心, 广东广州 510360

基金项目:

广州市农业科技招标项目(GK0401004)

广东省农业科技项目(200844507)

作者简介:
刘运权(1980-), 男, 广东韶关人, 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室助理实验师.

通讯作者: 刘伟,教授.E-mail:liuwei@scau.edu.cn,联系电话:020-38297712

收稿日期: 2010-09-06

中图分类号: Q943.1;S 682.31

关键词:

金钗石斛 /

PLBs /

原生质体 /

分离

摘要: 以具有较多生长点的金钗石斛PLBs为材料,研究通过酶解法获得原生质体的适宜条件。结果表明,酶液配比为φ=1%纤维素酶(Cellulase Onozuka R10)+φ=0.4%果胶酶(Macerozyme Onozuka R10)+0.65mol·L^-1甘露醇,pH5.7;黑暗条件下,(25±2)℃,60r·min^-1振荡酶解6h,800r·min^-1离心分离4min,获得的原生质体质量较好。经计数和伊凡蓝染色法检测,用此法获得的金钗石斛PLBs原生质体鲜质量产量为(8.25±0.17)×10⁵个.g^-1,活性为(90.24±1.84)。(蓝光(470～75nm)激发活力检测发现较小的分生细胞具有较强的活力。

English Abstract

Isolation of the Protoplast from Dendrobium Nobile Lind1 PLBs

1. Key Lab Plant Funct Genom & Biotechnol, Educ Dept of Guangdong Prov, Guangzhou 510642, China;

2. College of Life Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;

3. Guangzhou Flower Research Center, Guangzhou 510360, China

Received Date: 2010-09-06

Keywords:

Abstract: In order to obtain regeneration Dendrobium nobile Lind1 through protoplast isolation and cultivation,protoplasts were isolated from PLBs of Dendrobium nobile Lind1. The effects of various factors （composition of enzymes,digestion time,concentrations of osmotic pressure stabilize （mannitol）,centrifugation speed,purification methods,pretreatment of the material and the methods of vigor test） on the yield,viability and division of protoplasts were investigated. The results indicated that the optimum condition for protoplast isolation was established by using 1% cellulase R-10 and 0.4% macerozyme R-10 in 0.65 mol·L^-1 mannitol （pH5.7） solution for cell wall digestion; the mixture of PLBs and enzyme solution was incubated at （25±2）℃ in dark for 6h on a rotary shaker with an agitation speed of 60 rpm,with adoption of 50—100μm filters to remove undigested tissues and debris,and after centrifugated at 800 rpm for 4min,the maximum yield （8.25±0.17）×10⁵ per gram PLBs and the high viability （90.24±1.84）% were obtained. These data suggested that the small meristem cells of PLBs were good source of intact protoplast.

刘运权, 张翠焕, 闻真珍, 黎扬辉, 刘伟. 金钗石斛类原球茎原生质体的分离[J]. 热带生物学报, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

引用本文:

刘运权, 张翠焕, 闻真珍, 黎扬辉, 刘伟. 金钗石斛类原球茎原生质体的分离[J]. 热带生物学报, 2010, 1(3): 215-219. doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

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金钗石斛类原球茎原生质体的分离

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

第一作者: 刘运权(1980-), 男, 广东韶关人, 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室助理实验师.

通信作者: 刘伟,教授.E-mail:liuwei@scau.edu.cn,联系电话:020-38297712

Isolation of the Protoplast from Dendrobium Nobile Lind1 PLBs

计量

出版历程

金钗石斛类原球茎原生质体的分离

doi: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2010.03.010

1. 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室, 广东 广州 510642; 2. 华南农业大学 生命科学学院, 广东 广州 510642; 3. 广州花卉研究中心, 广东 广州 510360

作者简介: 刘运权(1980-), 男, 广东韶关人, 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室助理实验师.

通讯作者: 刘伟,教授.E-mail:liuwei@scau.edu.cn,联系电话:020-38297712

English Abstract

Isolation of the Protoplast from Dendrobium Nobile Lind1 PLBs

1. Key Lab Plant Funct Genom & Biotechnol, Educ Dept of Guangdong Prov, Guangzhou 510642, China; 2. College of Life Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 3. Guangzhou Flower Research Center, Guangzhou 510360, China

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第一作者:
刘运权(1980-), 男, 广东韶关人, 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室助理实验师.

通信作者:
刘伟,教授.E-mail:liuwei@scau.edu.cn,联系电话:020-38297712

1. 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室, 广东广州 510642;

2. 华南农业大学生命科学学院, 广东广州 510642;

3. 广州花卉研究中心, 广东广州 510360

作者简介:
刘运权(1980-), 男, 广东韶关人, 广东省高等学校植物功能基因组与生物技术重点实验室助理实验师.

1. Key Lab Plant Funct Genom & Biotechnol, Educ Dept of Guangdong Prov, Guangzhou 510642, China;

2. College of Life Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China;

3. Guangzhou Flower Research Center, Guangzhou 510360, China